1、PCR 产物测序时出现重叠峰
问题图1(模板中有碱基缺失,往往是单一位点(1-1)或两个位点(1-2)碱基缺失导致测序
结果移码)
图1-1
图1-2
解决方法:将PCR 产物克隆到质粒(如T 载体)中挑单克隆测序,或将PCR 产物进行PAGE
纯化(至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化)后再进行测序。
问题图2(PCR 产物不纯,含部分序列一致的两种以上的片段,长度不一)
图2
解决方法:主要原因是PCR 产物没有纯化,含有部分序列一致的两种以上长度不一的片段,将PCR 产物进行PAGE 纯化(至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化)后再进行测序,便可解决。
问题图3(测序引物有碱基缺失)
