缺口翻译法的原理
限量DNase I在待标记的双连DNA的每一条连上产生若干个单连缺口
利用E.coli DNA多聚酶I的5’-3’外切酶的活性和5‘-3’多聚酶的活性，在缺口处5’末端每切除一个核苷酸，则在3’末端添加一个核苷酸，以修补缺口。
随着缺口在5’末端的移动修饰的核苷酸就掺入到新合成的DNA连中
缺口翻译法的特点
1）快速、简便、标记的探针均一、特异性高
2）仅适用于较长的双连DNA
3）DNA多聚酶必须是E。Coli DNA多聚酶的全酶
4）DNA酶I的浓度一定要适宜
（二）随机引物法（random priming )
随机寡核苷酸引物（random primer)：含有各种可能排列顺序的寡核苷酸片段的混合物，可以与任意核苷酸序列杂交，起到聚合酶反应引物的作用
E。coli DNA聚合酶I的Klenow大片段（仅具有5-3多聚酶的活性，而无外切酶的活性）
随机引物法标记的原理
变性后的探针DNA或RNA与随机引物混合
随机引物按碱基互补的原则与模板DNA 的相应区域结合
DNA多聚酶I的Klenow大片段即从引物3’-OH端开始合成互补DNA连
反应中若加入修饰的dNTP即可获得标记的DNA探针
随机引物法的特点
1）不但可用于双连DNA的标记，而且可用于单连DNA和RNA的标记
2）操作简单
3）标记率高
(三）末端标记法
末端脱氧核苷酸转移酶法（terminal deoxynucleotide transferase)
5’——DNA——3’OH+-32 p- dNTP
↓
5’——DNA——3’(pdN)n +nPPi (焦磷酸）
T4多核苷酸激酶法（method of T4 polynucleotide kinase)
T多核苷酸激酶法（method of T4 polynucleotide kinase)
（四）cDNA探针的标记
（五）RNA探针的标记
