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siRNA的设计与制备
作者:iris_palm 来源:丁香园 时间:2007-8-10

    如何有效的将siRNA或者siRNA表达载体导入目标细胞是RNAi实验的关键步骤,影响RNA干扰的最终效果。对于一些难以进行转染的细胞,用传统的转染方法通常很难取得好的效果。BD?Clonteh公司最新推出的Knockout RNAi 系统和 RNAi-Ready pSIREN 载体充分利用了病毒对宿主细胞的高效侵染性,彻底克服某些细胞转染效率低的障碍,是实现哺乳动物细胞siRNA瞬时表达与稳定表达的理想工具。(见figure 9)

    BD™ Knockout Adenoviral RNAi Systems 系统能快速、方便的形成表达发夹结构的siRNA的重组腺病毒,从而有效的侵染到各种宿主细胞。
    BD Knockout Adenoviral RNAi System 1使用RNAi-ready pSIREN Shuttle vector,通过酶切连接构建腺病毒DNA质粒。包装成腺病毒颗粒后可以感染分裂及非分裂期的宿主细胞,可实现高水平表达。系统中包括RNAi-ready pSIREN Shuttle vector,阳性对照(萤光素酶siRNA的DNA模板)和阴性对照。同时 BD Clontech还提供一系列的腺病毒实验相关工具。(见figure 10)

    BD Knockout Adenoviral RNAi System 2使用pSIREN-DNR Vector,运用了同源重组的技术,即Creator技术,快速得到腺病毒DNA质粒,简化了筛选有效siRNA过程中烦琐的克隆步骤。系统中包括RNAi-ready pSIREN-DNR vector,阳性对照(萤光素酶siRNA的DNA模板)和阴性对照。(见figure 11)

    BD Clontech pSIREN-RetroQ 逆转录病毒载体能进一步包装成重组逆转录病毒,高效感染处于分裂期的目的细胞,并将自身携带的质粒整合到宿主细胞的基因组中,从而快速获得稳定表达siRNA的细胞系,这对于进行长期RNAi研究带来了极大的便利。

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