Martinez等研究表明,以CXCR4- siRNA转染 CXCR4+-U87-CD4+细胞,48h后细胞CXCR4表达减少到63%,而CCR5- siRNA转染 CCR5+-U87-CD4+细胞可使CCR5表达降低到48%。 CXCR4、CCR5的表达降低有效地抑制CXCR4+的U87-CD4+细胞被X4(NL43)HIV感染、有效地抑制CCR5+的U87-CD4+细胞被R5(Bal)HIV感染。

Suppression of CXCR4 by short-interfering RNA. HeLa-green fluorescent protein (GFP) cells were mock transfected (control) or transfected with a short-interfering RNA (siRNA) directed to CXCR4 (RNAX42i). After 48 h, cells were labelled with anti-CXCR4 monoclonal antibody (12G5) and a secondary rhodamine-conjugated antibody and visualized in a Nikon fluorescence microscope. CXCR4 and GFP expression were quantified by flow cytometry analysis. Mean fluorescence intensity (MFI) values are shown.
RNAi与肝炎病毒
Shlomai 和 Shaul 设计了各针对HBV基因19nt的两种pSUPER载体:pSUPER X-siRNA和pSUPER core-siRNA。已转染含1.3 X wt HBV基因质粒载体的Huh7细胞再被 X-siRNA或 core-siRNA转染后,core蛋白水平分别降低了89%、63%,转染X-siRNA的细胞中HBsAg降低60%,但转染core-siRNA对HBsAg表达无明显影响(X-siRNA干扰沉默了所有的病毒转录物,而core-siRNA仅沉默3.5kb、3.9kb的mRNA)。
另外,Randall等证明了针对HCV RNA的siRNA转染细胞4天后可使细胞质中复制的HCV RNA降低80倍;将 siRNA 转染至已有HCV感染、复制的细胞,siRNA对98%以上可检测到HCV抗原、HCV复制活跃的细胞有抑制作用;siRNA干扰沉默HCV RNA具有剂量依赖性和序列特异性。Kapadia等 也证明了siRNA特异抑制HCV RNA复制、阻止相关蛋白表达的作用。
RNAi与其它病毒
Hu WY等证明了siRNA能阻抑逆转录Rous 肉瘤病毒(RSV)感染脊椎动物;
Leonid等发现针对脊髓灰质炎病毒中编码衣壳蛋白或编码病毒聚合酶的mRNA的siRNA可以抑制病毒复制,加速清除受染细胞中的脊髓灰质炎病毒;
Jia等发现Rta-siRNA( Rta是疱疹病毒基因表达的一种起始转录因子)和ORF45-siRNA能特异阻止疱疹病毒复制。
问题与展望
RNAi是近年来才发现的一种古老的、保守的生物途径,是生物体适应外界环境、调控基因表达、防止外来遗传因子入侵的重要机制,具有重大的生物学意义。
RNAi现已成为国内外研究的热点,不久前被《Science》评为2002年最重大科技突破。随着对RNAi机制研究的深入和RNAi技术的不断完善,RNAi有望成为治疗病毒感染性疾病的新方法。
存在的问题
目前siRNA导入胞内的效率低下,如何有效将siRNA转移入体内成为RNAi应用的最大障碍;
如何在目的基因序列上选择21-23nt左右的序列作为siRNA 的模板,从目前的研究来看,序列的选择原则尚不清楚;
目前RNAi 机制尚未完全阐明,尤其在哺乳动物细胞中的研究报道不多。

