限制性核酸内切酶酶切反应：
用HEPES（见表）将DNA溶液的pH值调到酶切所要求的范围。作为另一可选方案，也可以用pH值为7—8的1 mM EDTA透析DNA样品。每ug的DNA加3-5单位的酶。酶切条件按照酶制造商的说明进行，反应时间为3—24小时。在标准的测定中，80—90%的DNA是可被消化的。
溶于8 mM NaOH中DNA样品pH值的调整：
（每1 ml 的8 mM NaOH使用以下数量的0.1 M 或1 M HEPES，游离酸。）
DNA抽提注意事项：
1.苯酚层和中间层可以在2—8℃下放置过夜。
2.溶于75%酒精中的DNA可以在2—8℃下放置数月。
3.溶于8 mM NaOH中的DNA可以在2—8℃下放置过夜，若要长期保存，将其pH值调整到7—8，并调整EDTA的浓度到1 mM。
疑难解答：
DNA抽提
•每mg组织或1×106培养细胞预期的DNA产量
1.肝和肾，3—4μg
2.骨骼肌，脑组织，和胎盘，2—3μg
3.培养的人，大鼠，小鼠细胞(1×106)，5—7μg
4.纤维母细胞，5—7μg
•产量低
1.样品匀浆化或裂解不完全。
2.终DNA不完全再溶解。
•A260/280比值<1.70
1.在分光光度计测量前用水而不是用TE缓冲液稀释DNA样品。
2.DNA样品中的苯酚没有完全去除。用0.1 M的柠檬酸钠（用10%酒精配制）再洗涤DNA沉淀一次。
•DNA降解
1.从动物身上取下的组织没有立即处理或冰冻。
2.用于抽提的样品，或已经抽提的RNA样品存放于-5—-20℃，而没有存放于-60—-70℃。
3.使用了Polytron或其他高速的匀浆器匀浆样品。
•RNA污染
1.水样层没有完全去除。
2.用0.1 M的柠檬酸钠（用10%酒精配制）洗涤DNA沉淀不完全。
•其他的应用方面
在行PCR扩增前调整pH值到8.4。
对用于限制性核酸内切酶消化的DNA,调整其pH值到所需的范围，每μg的DNA加3—5单位的酶，对某些特殊的酶最佳条件下允许的反应时间在3—24小时内。一般而言，80—90% 的DNA均可以被消化。
原文下载:DNA抽提指南
