（四）细胞转染（tansfection）
将目的基因导入靶细胞的方法很多，大致可分为物理学方法、化学方法、融合法和病毒感染法四类。病毒法已在本节的“基因的转运”中有基因介绍。目前较多使用的是脂质体法。
表3 DNA导入哺乳动物细胞常见的方法
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名称 |
机制 |
转染效率 |
用途 |
优缺点 |
影响因素 |
| 磷酸钙转染法 | 内吞作用 | 20%细胞被转染 | 瞬时表达 | 1、简单有效 2、适用于贴壁、非贴壁细胞 |
1、Ca2+，DNA浓度 2、PH值，沉淀反应时间 3、氯喹，甘油和丁酸钠处理 |
| DEAE葡聚糖转染法 | 抑制核酸酶 内吞作用 |
在BDC-1，CV-1和COS细胞中较高 | 瞬时表达 | 操作简单 | 1、需高浓度DNA 2、DEAE葡聚糖浓度 3、温育时间 |
| Poly-brene转染法 | 不清楚 | 低分子量DNA转染率高于磷酸钙法 | CHO细胞的稳定转化子 | 能得到较多的稳定转化子 | 1、受体细胞类型 2、转染调控信号 3、DNA浓度 |
| 原生质体融合 | 胞膜融合 | 50-100%转染，稳定子得率为0.2-0.02% | 瞬时表达 稳定表达 |
1、操作复杂 2、不能进行共转染 3、慎用于筛选营养缺陷型变异株 |
1、溶菌酶、PEG浓度 2、温育时间 |
| 电穿孔 | 高压在膜上形成微孔 | 效率较高 | 瞬时表达 稳定转化 |
1、需精密仪器 2、可用于动物、植物细胞和细菌 |
1、需精密仪器 2、可用于动物、植物细胞和细菌 |
| 脂质体 | 脂膜融合 | 50-60%转染 | 瞬时表达 稳定转化 |
1、操作简单 2、可用于体内试验 |
1、脂质体质量 2、DNA浓度 |
| 聚合物 | 电荷、内吞作用 | 70-95%转染 | 瞬时表达 稳定表达 |
1、操作简单 |
1、聚合物/DNA比例 2、靶细胞类型 |
| 胞核微注射法 | 直接注射 | 50-100%转染 | 稳定转化 | 1、需要特殊仪器 2、处理样品数量少 3、高效 |
1、注射技术 2、DNA浓度 |
