病毒纯化是病毒研究中的主要步骤难点，密度梯度离心是病毒纯化中比较常用的方法，常常被许多实验室采用［9］。蔗糖因对病毒损伤较小，基本不破坏病毒的外壳蛋白，在病毒纯化中显示了一定的优越性［10，11］，但在蔗糖密度梯度离心中，其形成的带常常比较松散，这样，要想把病毒和细胞培养物分离开就比较困难,氯化铯密度梯度形成条带比较紧密，这样就可以得到比较纯的病毒。该方法重复性好，具备超离设备的实验室可以用来纯化足量的病毒［12］。
对上样前的RV样品用三氟三氯乙烷抽提，可以去除许多细胞培养物，给病毒纯化带来方便。我们比较了用三氟三氯乙烷抽提和不用三氟三氯乙烷抽提，结果显示，用三氟三氯乙烷抽提能去除许多杂质（见图2），但也造成了病毒的损伤（见图1），因为抽提过的样品所形成的条带比不抽提过的条带位置更低（轮状病毒外壳蛋白被损伤，其密度将变大，故条带下移）。微量滴定［11］结果也显示，抽提过的样品其感染性滴度也有所降低（带1和带3约降低7%～8％，带2约降低18％）。另外，抗轮状病毒Vp6的特异性抗体的Western blot的结果说明，纯化的RV保存了完整的外壳蛋白Vp6。
以上结果表明，CsCl密度梯度离心法是一种从感染细胞培养上清中分离纯化轮状病毒较好的方法，此方法纯化得到的样品为进一步研究RV的结构和功能打下了很好的基础。
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作者单位： 650118 云南昆明，中国医学科学院 中国协和医科大学医学生物学研究所（△通讯作者）
作者简介：陈元鼎，男，1959年5月生；1982年1月毕业于云南大学生物系，理学士。1995年4月毕业于联合国工业发展组织国际遗传工程和生物技术中心（意大利），分子病理学博士后。现为中国医学科学院中国协和医科大学医学生物学研究所研究员。
主要从事分子生物学、分子病毒学，病毒免疫学和病毒疫苗的研究工作。至今主持完成过10余项省部级科研项目和国际合作项目，在国内外学术杂志上发表过70余篇学术论文，获得过8项省部级科技成果奖。
