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腺病毒载体及亚克隆构建中的一些经验分享
作者:erguo918 来源:丁香园 时间:2007-8-4

    3.AdMAX系统

    三、实验中的一些小技巧
    做腺病毒有很多小技巧,但在做实验之前最重要的一点就是要选择好载体系统,因为实验可以参考文献,哪一步遇到困难可以重新做,但载体系统一旦选择,再换就要浪费很多精力,时间和金钱。所以再讲实验技巧之前还要强调载体系统的选择。下面进行正题

    1)我的腺病毒毒种被细菌污染了,我没有多余的毒种,也没有构建好的载体我怎么办?
    答:因为腺病毒的直径大小是70-90nm,而细菌的直径大小要大的多,可以用22um的滤器过虑。如果您的病毒量很低,担心过虑后损失太多,无法进行后面的扩增工作,您可以先用污染了细菌的腺病毒直接扩增,当然扩增的结果是得到了污染了细菌的腺病毒,但病毒的量会提高一些,这样再用22um的滤器过滤。
    这个经验是帮助一个朋友扩增病毒时的经验。因为他的腺病毒样品从国外要国来的,但是污染了细菌,他就找到我们,我们就采取了上面的办法,最后得到的结果很不错。
    不过我还是建议,如果能够自己构建还是要自己构建的好,要来的病毒会有各种各样的问题。

    2)我从国外要来一个腺病毒,但我不确定这病毒里面是否连接了目的基因,这个目的基因序列有没有突变,我怎样鉴定?
    答:可以按照如下方法鉴定,
    ①针对基因设计引物,同时作为扩增和测序引物
    ②将病毒用蛋白酶K处理后做为模板,如果是未纯化的病毒还需要过纯化柱处理掉培养基的成分
    ③以处理过的病毒为模板进行PCR
    ④用PCR引物对PCR产物测序

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