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实时荧光定量PCR技术:定量分析功能及软件应用
作者:未知 来源:基因公司 时间:2007-8-1

    软件自动给出分析结果:

    同样,结果自动给出了待测样品相对于对照组目的基因的表达情况。

    比较定量法:
    另一种相对定量分析方法叫比较定量法(ComparativeQuantitation),该方法在芯片结果验证中的应用相对较多。
    比较定量法的特点、注意事项及实际应用:
    1.必需确定起始样品的总核酸浓度一致。在芯片验证时使用较多,但同样也必需有起始浓度一致的核酸样品。
    2.作为常规的基因表达调控研究,建议研究者使用前两种定量方法。
    3.该方法通过拐点时的循环数来进行相对定量比较,重复性更好。
    4.该方法操作非常简便,无需做标准曲线及设置内参。使用时,样品均定义为unknown,分析时选用ComparativeQuantitation,确定对照组,完成分析。

    应用实例:

    用Comparative Quantitation法进行定量分析时,在保证起始总核酸量一致的前提下,只要对目的基因进行扩增即可,例:待测样品A、B、C,扩增目的基因。在软件中选择相应方法,即得以下结果:

    上图左下方即相对表达量的结果,其中Rep.Conc为样品B、C相对于对照组A的目的基因浓度。右侧,可通过修改Calibrator Replicate改变对照组,以获得不同的比较结果。

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