MEGAscript™ RNAi Kit
合成大量纯净的双链RNA是RNAi实验成功的关键。这个基于专利的转录高产技术的产品正是为大量合成用于RNAi实验的dsRNA而优化的。试剂盒要求用两端带有T7启动子序列的目的基因作为模板（200nt以上，模板可以是质粒载体上的，也可以是用带有T7序列的引物扩增的PCR产物，另外也可以选用一个叫Lig'n Scribe Kit可以将T7 Prometor序列直接连接到DNA片断的两端），将模板和试剂盒提供的dNTP、酶等混合，根据模板的长短进行体外转录反应。每次反应可以合成50ug—100ug甚至更多的dsRNA(800nt以上的需要先加热变性并褪火形成双链)，产量是常规的10—50倍，整个试剂盒总产量可达2mg（20次反应，每次100ug）。合成的产物经过DNase I消化去除DNA模板，再经过特殊的单链RNase（试剂盒里提供，后文介绍）除去单链的RNA，最后经过柱纯化就得到纯的双链RNA，即可用于RNAi实验。由于这个试剂盒提供全套产品，使用相当方便。
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Silencing of Drosophila hrp48 and U2AF50 Protein by dsRNA.
A. Specific Reduction of Expression Levels. 1 x 106 Schneider's Drosophila melanogaster L2 cells were grown in 6-well plates in serum-free medium and treated with 10 nM of dsRNA specific for either hrp48 or U2AF50. dsRNA were prepared with the MEGAscript RNAi Kit and post-transcriptionally labeled with Cy3 using the Silencer siRNA Labeling Kit when indicated (+). Cells were harvested 72 hours post treatment and the silencing effect was analyzed by Western blot with anti-hrp48 (48 kDa, migrates as a doublet) and anti-U2AF50 (50 kDa) antibodies. An antibody directed against Pab 1 (lower panel) was used as a second negative control. B. Dose-sensitive Reduction of Protein Expression Levels. dsRNA-triggered silencing of hrp48 was analyzed as in Figure 2a using the indicated concentrations of hrp48 dsRNA made with the MEGAscript RNAi Kit. Western analysis was also performed with the anti-U2AF50 (bottom panel) and Pab 1 (data not shown) antibodies as negative controls. |
HiScribe™ RNAi Transcription Kit
RNA干涉（RNA interference)是近年产生的研究转录后剪切的一种实验方法。它将目的基因所对应的双链RNA 导入生物体，导致相应的mRNA降解。和反义技术不同的是, 在基因表达恢复之前，RNA干涉现象将持续多个细胞分裂周期， 因而它是一种有力的研究基因功能的工具。它不是传统的在DNA水平基因敲除，而是通过RNA干涉，在RNA水平上去除目的RNA。这样大量基因功能可以快速经济地进行检测。
HiScribe™ RNAi Transcription Kit也是一个体外合成双链RNA进行RNA干涉实验的试剂盒。不同于前者的是，这个试剂盒提供质粒作为载体，方便了以后的扩增和复制。LITMUS™ 载体多克隆位点两端带T7启动子。目的序列插入多克隆位点，利用T7 RNA 聚合酶同时转录DNA摸板的双链，合成双链RNA。载体启动子为T7野生型序列，是已知最强的启动子之一，以保证转录产率的最大化。带有插入lacZ a片段供蓝白筛选。
