融合
方法一：
1．将1ml 40%的PEG液一滴滴加入到细胞团中，在60秒内加完，同时并不断轻微转动离心管或用手指轻弹离心管。
2．在不断转动离心管中加1ml无血清培养液，60秒钟内加完。
3．于5分钟内慢慢加完20ml无血清培养基。此时细胞对机械损伤非常敏感。
4．离心（800转/分，8分钟），去上清，用完全培养液10ml悬浮，轻轻混匀。
5．取96孔板，每孔加50微升。
6．取等体积细胞悬液，向另一96孔板中加50微升。
7．送入5%CO₂温箱中37℃培养，24小时后更换成HAT选择性培养液。
 
方法二：
1．加0.2ml 43%的PEG于离心管中。 
2．用预先消毒的细玻璃针伸入管中轻轻搅动细胞团。
3．室温中置2分钟。
4．加入10ml完全培养液。
5．800转/分离心5分钟。
6．用2倍HAT培养液培养悬浮细胞，取24孔板，每孔中加0.5ml，另96孔板每孔中加0.1ml。
7．5%CO₂温箱，37℃，一周后第一次更换培养液，培养板中预先接种有饲养细胞，加2×HAT选择培养液与原等量培养液混合后，即成为1×的HAT培养基。
 
融合后细胞培养
1．融合后7~10天用HAT培养液变量换液，以后每隔2~3天半量换液一次。
2．两周后可改用HT培养液半量换液，或仍用HAT培养液。
3．2~3周后出现杂交细胞集落，细胞个大，圆且透明。
4．待集落增殖生长至1/3孔时，应进行抗体检测。
 
克隆化培养
[软琼脂培养]
1．称1g琼脂粉，加入到100ml双蒸水中，高压蒸气灭菌，4℃冰箱保存。
2．使用前，1%的琼脂和2×的DMEM培养液在45℃水浴中分别温浴。
3．二者等体积混合后，立即加入1.5×10⁷小鼠脾细胞，混匀。
4．立即到入平皿中，每平皿（直径10cm）加10ml，室温中置15分钟。 
5．另取杂交瘤细胞悬液和0.5%琼脂等体积混合（0.25%琼脂），加2ml到预先铺有底层琼脂的瓶皿内。
6．CO₂温箱培养。
7．10~15天后，有细胞集落形成，适时移入24孔培养板中扩大培养。如用琼脂糖，底层浓度为0.6%，上层为0.3%琼脂。
 
[有限稀释法]
1．制备有饲养细胞底层的细胞培养板。
2．收集细胞、计数阳性培养细胞。
3．细胞悬液调至5~10个细胞/ml。
4．96孔板中每孔加0.1ml。
5．CO₂温箱培养一周后，半量换液，继续培养。
6．适时检测每孔培养上清，挑选呈阳性培养孔的细胞继续进行有限稀释，直至确信孔中细胞为单克隆为止。
7．进行扩大培养。
 
5）抗体的检测
常用方法：免疫荧光试验、放射免疫试验（RIA），酶联免疫吸附试验（ELISA）等。

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