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SDS-PAGE电泳小问答
作者:未知 来源:生物秀 时间:2007-7-23


    Q:“微笑”(两边翘起中间凹下)形带原因?
    A:主要是由于凝胶的中间部分凝固不均匀所致,多出现于较厚的凝胶中。
    处理办法:待其充分凝固再作后续实验。

    Q:“皱眉”(两边向下中间鼓起)形带原因?
    A:主要出现在蛋白质垂直电泳槽中,一般是两板之间的底部间隙气泡未排除干净。
    处理办法:可在两板间加入适量缓冲液,以排除气泡。

    Q:为什么带出现拖尾现象?
    A:主要是样品融解效果不佳或分离胶浓度过大引起的。
    处理办法:加样前离心;选择适当的样品缓冲液,加适量样品促溶剂;电泳缓冲液时间过长,重新配制;降低凝胶浓度。



    Q:什么是“鬼带”,如何处理?
    A:“鬼带”就是在跑大分子构象复杂的蛋白质分子时,常会出现在泳道顶端(有时在浓缩胶中)的一些大分子未知条带或加样孔底部有沉淀,主要由于还原剂在加热的过程中被氧化而失去活性,致使原来被解离的蛋白质分子重新折叠结合和亚基重新缔合,聚合成大分子,其分子量要比目标条带大,有时不能进入分离胶。但它却于目标条带有相同的免疫学活性,在WB反应中可见其能与目标条带对应的抗体作用。
    处理办法:在加热煮沸后,再添加适量的DTT或Beta巯基乙醇,以补充不足的还原剂;或可加适量EDTA来阻止还原剂的氧化。

    Q:为什么溴酚蓝不能起到指示作用?
    A:我们在实验中常会遇到溴酚蓝已跑出板底,但蛋白质却还未跑下来的现象。主要与缓冲液和分离胶的浓度有关。
    处理办法:更换正确pH值的Buffer;降低分离胶的浓度。

    Q:为什么电泳的条带很粗?
    A:电泳中条带很粗是常见的事,主要是未浓缩好的原因。
    处理办法:适当增加浓缩胶的长度;保证浓缩胶贮液的pH正确(6.7);适当降低电压;

    Q:为什么电泳电压很高而电流却很低呢?
    A:这种现象一般初学者易出现。比如电压50v以上,可电流却在5mA以下。主要是由于电泳槽没有正确装配,电流未形成通路。包括:a.内外槽装反;b.外槽液过少;c.电泳槽底部的绝缘体未去掉(比如倒胶用的橡胶皮)。
    处理办法:电泳槽正确装配即可。

    Q:浓缩胶与分离胶断裂、板间有气泡对电泳有影响吗?
    A:这主要出现在初学者中,一般对电泳不会有太大的影响。前者主要原因是拔梳子用力不均匀或过猛所致;后者是由于在解除制胶的夹子后,板未压紧而致空气进入引起的。
    处理办法:按正确的操作方法操作。

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