3)不需制备探针、杂交等程序,成本较低。
4)DNA用量少(10ngDNA即可完成一次分析),允许快速、简单地分离基因组DNA。已在遗传图谱构建、种质资源分析、基因标记等方面得到了广泛的应用(惠东威,1992)。RAPD是一种显性标记,分离群体中纯合体和杂合体通过后代才能区别,并且由于该技术采用的是随机引物扩增,扩增结果的稳定性较差,这在一定程度上限制了其发展。

图7-4 RAPD图谱
(二)特异性扩增子多态性(Specific Amplificon Polymorphism,SAP)
RFLP技术成本高,实验步骤多,周期长;RAPD标记稳定性较差,不利于育种中应用。在用RFLP和RAPD分析找到多态性DNA片段以后,将它们转化为特异性扩增子多态性(Specific Amplificon Polymorphism,SAP)或称序标位(Sequence Tagged Sites,STS)可以解决这些缺点。主要包括以下两种:
1)酶切扩增多态性序列(Cleaved Amplified Polymorphic Sequence,CAP)将RFLP探针的两端测序,合成22-mer引物进行PCR扩增,扩增产物往往无多态性,需用内切酶酶解产物,产生多态性。
2)序列特异性扩增区(Sequence-characterized Amplified Region,SCAR)和位点特异相关引物(Allele-Specific Associated Primers,ASAP),对RAPD、AFLP片段两端测序,根据DNA序列,合成24-mer双引物进行PCR扩增。SCAR、CAP可以降低了成本,操作简便,稳定性强,对仪器要求低,可实现自动化分析,适合于大样本的快速分析。
(三)简单重复序列(Simple Sequence Repeat,SSR)
简单重复序列(Simple Sequence Repeat,SSR)或称微卫星DNA(Microsatellite Repeat)、简单串联重复序列(Short Tandem Repeat Polymorphism,STRP)。在真核生物中,存在许多2-5bp简单重复序列,称为“微卫星DNA”其两端的序列高度保守,可设计双引物进行PCR扩增,揭示其多态性。

