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分子标记技术
作者:佚名 来源:生物秀 时间:2007-7-23

    3)不需制备探针、杂交等程序,成本较低。                

    4DNA用量少(10ngDNA即可完成一次分析),允许快速、简单地分离基因组DNA。已在遗传图谱构建、种质资源分析、基因标记等方面得到了广泛的应用(惠东威,1992)。RAPD是一种显性标记,分离群体中纯合体和杂合体通过后代才能区别,并且由于该技术采用的是随机引物扩增,扩增结果的稳定性较差,这在一定程度上限制了其发展。


    图7-4 RAPD图谱

    (二)特异性扩增子多态性(Specific Amplificon PolymorphismSAP
      RFLP技术成本高,实验步骤多,周期长;RAPD标记稳定性较差,不利于育种中应用。在用RFLPRAPD分析找到多态性DNA片段以后,将它们转化为特异性扩增子多态性(Specific Amplificon PolymorphismSAP)或称序标位(Sequence Tagged SitesSTS)可以解决这些缺点。主要包括以下两种:          

    1)酶切扩增多态性序列(Cleaved Amplified Polymorphic SequenceCAP)将RFLP探针的两端测序,合成22-mer引物进行PCR扩增,扩增产物往往无多态性,需用内切酶酶解产物,产生多态性。                     

    2)序列特异性扩增区(Sequence-characterized Amplified RegionSCAR)和位点特异相关引物(AlleleSpecific Associated PrimersASAP),对RAPDAFLP片段两端测序,根据DNA序列,合成24-mer双引物进行PCR扩增。SCARCAP可以降低了成本,操作简便,稳定性强,对仪器要求低,可实现自动化分析,适合于大样本的快速分析。

    (三)简单重复序列(Simple Sequence RepeatSSR
      简单重复序列(Simple Sequence RepeatSSR)或称微卫星DNAMicrosatellite Repeat)、简单串联重复序列(Short Tandem Repeat PolymorphismSTRP)。在真核生物中,存在许多2-5bp简单重复序列,称为“微卫星DNA”其两端的序列高度保守,可设计双引物进行PCR扩增,揭示其多态性。

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