浸泡前4-5天

电转化后农杆菌接种在含20 mg/l Kan、15 mg/l Genta的LB选择平板上，在28℃培养箱中培养2-3天至可见微小单克隆为止。在超净工作台上将散开分布的微小单克隆标记5个（不要大菌落），在同样成份的新鲜选择平板上按顺序标记1、2、3、4、5，然后用牙签挑取在对应序号右划直线，之后在28℃培养箱中培养2-3天。

浸泡前2天

取50 ml Falcon试管，配制含20 mg/l Kan、15 mg/l Genta的液体LB培养基10 ml。选择好生长最慢的那个序号的农杆菌，在超净工作台上用牙签接种，凡挑三次，在试管壁研磨，务使细菌分散。在28℃、200-220 rpm速度下振荡培养过夜。如在第二天发现农杆菌结块，可用涡旋振动使之分散均匀再培养。

浸泡前1天

配制500 ml含20 mg/l Kan、15 mg/l Genta的液体LB培养基。每L称量10 g Tryptone Yeast、5 g Extract、10 g NaCl，调节到pH 7.0。待灭菌后加入抗生素。

从50 ml Falcon试管中接种6 ml农杆菌悬浮液到含20 mg/l Kan、15 mg/l Genta的的500 ml LB培养基的大三角瓶，在28℃、200-220 rpm速度下振荡培养过夜。

花器浸泡当天

配制接种培养基（inoculation medium）：5%蔗糖（50 g/l）、0.025% Triton X-100 （250 µl/l）、1/2ATS培养基。每种农杆菌需要300 ml接种培养基。

从温室取上正在开花的拟南芥植株，每株作好不同颜色的标记（如K16L22 E1A3及浸泡日期），将植株上部拢成一绺。

取2个离心Nalgene离心瓶（250 ml）作好标记，将的大三角瓶中的500 ml 农杆菌悬浮液分装到2个Nalgene离心瓶中，取出600 ul到微量离心管（1.5 ml）中，稍后在超净工作台上加入同样体积的30% glycerol的LB培养基，置于-80℃保存。对Nalgene离心瓶的农杆菌悬浮液在3000 rpm下离心12 min，离心结束后，将上清倒回大三角瓶中，作为废液进行灭菌处理。

用25 ml微量移液器取20 ml接种培养基到每个Nalgene离心瓶中，用移液器吹吸混匀，然后用剩余的（每个离心瓶用230 ml，两个一起混入）接种培养基混合倒入Weck玻璃罐（500 ml）中，每罐约250-300 ml。

将拟南芥的上部缓缓、螺旋式浸入Weck玻璃罐的接种培养基内，轻轻顺时针晃荡，约30 sec，后小心将拟南芥植株连同培养容器平躺放入苗盘中，每盘2株。用透明塑料罩盖严，放入温室过夜。

使用后的Nalgene离心瓶和Weck玻璃罐用10% bleach消毒，三角瓶中的废液和转化培养基拿到消毒室高温高压灭菌处理。

浸泡后2-3周

保证植株水分充足。当植株停止开花，第一个果荚成熟变黄时，用纸袋套住，当纸袋内的所有果荚变黄后，停止浇水，1-2周干燥后取回实验室，进行转化种子选择。