转染步骤
使用Lipofectamine™ 2000转染Stealth™ RNA或者siRNA进入哺乳动物细胞时，使用下述步骤。参阅下列表格《推荐试剂的量和体积》以确定加入不同组织培养方式的试剂量以及体积。使用推荐Lipofectamine™ 2000的量作为起始点，针对您的细胞系和Stealth™ RNA或者siRNA进行条件优化。
1 转染前一天，在不包含抗生素的适量的培养基中接种细胞，转染时细胞的汇合度要达到30-50％。
2 每一个转染样品都要按照如下的方法准备寡聚物- Lipofectamine™ 2000复合物：
a.在适量的不包含血清的Opti-MEM® I 低血清培养基稀释Stealth™ RNA或者siRNA寡聚物，轻轻混匀。
b.使用前轻轻混合Lipofectamine™ 2000，然后稀释适量的试剂到Opti-MEM® I 低血清培养基，轻轻混匀后在室温下孵育5分钟。
注：在30分钟内混合稀释的Lipofectamine™ 2000和稀释的寡聚物。更长的孵育时间可能会降低活性。
c.孵育5分钟后，混合稀释的寡聚物和稀释的Lipofectamine™ 2000，轻轻混合，在室温下孵育20分钟，以便允许复合物的形成。溶液可能出现混浊，但是这不会影响转染。
3 将寡聚物- LipofectamineTM2000复合物加入到每一个包含细胞和培养基的孔中。通过轻轻地前后摇动培养板混合。
4 37℃，CO2培养箱孵育24-96小时，直到适合进行基因阻断分析。不需要去除复合物或者改换培养基；然而，在转染后4-6小时改换培养基也不会损失转染的活性。
推荐试剂量和体积
下表列出了通过各种组织培养方式转染细胞时推荐使用试剂的量和体积。使用推荐量的Stealth™ RNA或者siRNA（参看第4列）和Lipofectamine™ 2000（参看第6列）作为实验的起始点，针对您的细胞系和目的基因优化条件。注：20μM Stealth™ RNA或者siRNA＝20pmol/μl。
| 培养板 | 相对表面积（相对24孔） | 铺板培养基体积 | Stealth™ RNA或者siRNA（pmol）和稀释体积（µl） | 优化Stealth™ RNA或者siRNA（pmol）的量 | Lipofectamine™ 2000（µl）和稀释体积（µl） | 优化Lipofectamine™ 2000（µl）的量 |
| 48孔 | 0.4 | 200 μl | 25 μl 10 pmol |
2-25 pmol | 0.5μl 25μl | 0.3-0.8 μl |
| 24孔 | 1 | 500 μl | 50 μl 20 pmol |
10-50 pmol | 1μl 50μl | 0.5-1.5 μl |
| 6孔 | 5 | 2 ml | 250 μl 100 pmol |
50-250 pmol | 5μl 250μl | 2.5-6 μl |
参考文献：
1. Gitilin, L.,Karelsky,s.,and Andino,R.(2000) Nature 418,430-434.
2. Yu,J.L.,DeRuiter,S.L.,and Turner,D.L.(2002) Proc.Natl.Acad.Sci. USA 99,6047-6052
