试验程序
1.取制备分装好的感受态细胞，置于冰上5min.，加入连接产物10μl，轻轻混匀后置于冰上30min.。
2.然后置于42℃水浴中热击细胞50s.，再置于冰上2min.。
3.向各管中加入200μl在37℃下预热的LB培养基，37℃下振荡培养1小时。
4.与此同时，将LB平板置于37℃下片刻，每板加入44μl IPTG/X-Gal (4μl IPTG和40μl X-Gal )均匀涂布于平板表面放置约10min.使其吸附渗透。
5.将步骤3中培养的菌液涂布在制好的平板上，吹干后（在超净工作台中放置片刻）置于37℃下培养过夜。含有插入片断的菌落为白色。
E. 转化质粒的快速检测
试剂及其配制
煮沸缓冲液：蔗糖 8％
Triton X-100 1.5%
EDTA(pH 8.0) 50mmol/L
Tris-HCl(pH 8.0) 10mmol/L
LB培养基（同C）
氨苄青霉素（AP）（同D）
试验程序
1.选取白色单菌落，接种到3ml含AP的LB液体培养基中，37℃下振荡培养过夜。
2.将培养物等分成2份按菌落编号，每一菌落编号切勿出错。一份于4℃下保存备用，每一菌落编号切勿出错。另一份转入Eppendorf中，7000rmp离心2min.，弃去上清液，吸干残留液体。
3.将沉淀菌体细胞悬浮于350μl煮沸缓冲液中，加入25μl溶菌酶后，涡旋混合。
4.将管置于100℃沸水中煮40s.，取出立即在12000rmp条件下离心15min.。
5.取10μl上清液，加入溴酚蓝染料后，在0.8%琼脂糖胶上电泳。
6.在紫外灯下根据分子量检测插入片断的完整性。
如果不能确定转化片断的大小，则要进一步杂交、测序分析。选取经检测含有完整目的DNA片断的菌落，转接于2ml TB培养基（每升16g胰化蛋白冻/10g酵母提取物/5g氯化钠）中，37℃下振荡培养过夜，取850μl菌液加入到一2ml的冻存管中，再加入150μl 50%的甘油，混匀后置于液氮中快速冷冻，再置于-70℃条件下保存。
四、模板DNA的制备
A.质粒DNA的小量提取
试剂及其配制
含AP的LB液体培养基
TE缓冲液：10mmol/L Tris-HCl (pH 8.0)
1mmol/L EDTA (pH 8.0)
溶液I： 25mmol/L Tris-Cl (pH 8.0)
10mmol/L EDTA
50mmol/L 葡萄糖
高压灭菌15min.后，4℃贮存。
溶液II: 0.2mol/L NaOH
1% SDS（临用前现配制）
溶液III（100ml）：5mol/L 乙酸钾 60ml
冰乙酸 11.5ml
dH2O 28.5ml
4℃贮存。
酚∶氯仿（1∶1）
95%和70%乙醇
