刘芝华 中国医学科学院肿瘤研究所  分子肿瘤学国家重点实验室

概念：
基因组文库是含有某种生物体全部基因的随机片段的重组DNA克隆群体；cDNA文库是指含有所有重组cDNA的克隆群体。
 
基因组文库：来源于基因组DNA，反映基因组的全部信息，用于基因组物理图谱的构建，基因组序列分析，基因在染色体上的定位，基因组中基因的结构和组织形式等。
cDNA文库：来源于细胞表达出的RNA，反映基因组表达的基因序列信息，用于研究特定细胞中基因的表达状态和表达基因的功能等。 
基因文库＝基因组文库＋cDNA文库
 
载体的种类和特征：

	受体细胞	结构	插入片段	举例
质粒	E.coli	环状	很小，<8kb	pUC18/19 ,T-载体, pGEM3z
λ噬菌体	E.coli	线状	9-24kb	EMBL，λgt系列
丝状噬菌体及噬菌粒	E.coli	环状	<10kb	M13系列
粘粒载体	E.coli	环状	35-45kb
BAC	E.coli	环状	约300kb
PAC	E.coli	环状	100-800kb	PCYPAC
YAC	酵母细胞	线性染色体	100-2000kb
MAC	哺乳动物细胞	环状	>1000kb
病毒载体	动物细胞	环状		SV40 载体，昆虫杆状病毒载体
穿梭载体	动物细胞和细菌	环状		pSVK3质粒，PBV,Ti质粒，

基因组文库构建步骤：

· DNA的制备：高分子量的外源DNA 100-150kb
· 剪切：随机切割
· 载体：
l噬菌体：48.5kb,插入型(最多可容纳9kb)、取代型(可容纳 38-51kb，最适19-20kb)， EMBL, Charon 粘性质粒(Cosmid)：4-6kb, 质粒+噬菌体的性质，可容纳大片段的外源基因，最多可容纳46kb。
酵母人工染色体克隆体系（YAC，Yeast Artificial Chromosome  Cloning System）
插入大小200—1000kb
· 载体DNA的制备： 
 载体DNA酶切反应-----载体臂的纯化-----载体脱磷处理 （常用BamHI）   （蔗糖密度梯度离心）  （碱性磷酸酶）
· 连接和包装：外源片段与两臂之间的比例，包装蛋白
· 感染宿主菌：选择合适的宿主菌，LE392, NM538, NM539, KW251等
· 基因组文库的保存和扩增：完整性和代表性
测滴度，要在10⁶fu以上; 保存，氯仿4℃，7% DMSO -70℃

 人类染色体3X10⁹，平均插入片段大小17 kb

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