14℃连接过夜。
1.各取1ul连接产物作电转化（具体流程见电转化）
2.计算克隆数，计算载体相对脱磷效率及连接效率。

五.cDNA双链和载体的连接：
1.连接：
根据载体和cDNA的电泳定量结果，每个样品设置3个比例的连接，
即：insert/vector=1/3  incert/vector=1/1   insert/vector=3/1
按以下体系依次加入：

14℃，连接过夜
2．检测：（PCR方法）
取适量PCR薄壁管，置于冰上，按以下体系依次加入：
 
各试剂均加好后，离心机上甩一下，使之沉底，置于PCR仪上

待PCR反应进入4℃后，取下PCR薄壁管，取7ulPCR产物加入3ul溴芬兰跑电泳，同时上1Kb DNA ladder
半小时后照相，观察胶图：insert、vector、阴性三个样品除了有少量引物带（大约在200bp左右）外，均无其他带形。阳性带形清晰。好的连接产物应在500
至4、5Kb大小之内形成一条清晰的smear。 

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