8.去上清，取沉淀。加1ml4M的LiCl溶解沉淀（1mlLiCl/g组织），并转入1.5ml离心管中。
9.4℃，13000rpm离心15min。
10.用0.4mlDEPC水溶解沉淀，加1/2体积的水饱和酚，1/2体积的氯仿，颠倒混匀。
11.4℃，13000rpm离心10min。
12.取上清，加1/10体积的3MNaAc（ph5）和2倍体积的无水乙醇，－70℃沉淀30min以上。
13.4℃，13000rpm离心15min。
14.弃上清，用1ml75％的乙醇洗涤沉淀，4℃，13000rpm离心10min。
15.弃上清，取沉淀，空气中干燥RNA沉淀，直至无乙醇味。
16.用40－60ulDEPC水溶解(300-500ug/g)RNA沉淀。
17.取少量RNA用于测定OD值及电泳，其余置－80℃冰箱中保存。

(四).TRIzolReagent提取totalRNA(GIBCO)
1．查表2根据样品量选择适当的TRIzolReagent体积装入50mlRNase-free离心管中，注意样品体积不能超过TRIzolReagent体积的10%。
2．将组织样品放入TRIzolReagent中，高速下匀浆15-30秒/次，直至看不见组织和细胞碎片。
3．室温温育10分钟。
4．据表2加入适量体积的氯仿，剧烈震荡15秒钟，然后室温下温育3分钟。
5．4ºC，12000g离心15分钟，形成淡红色的苯酚/氯仿有机相，中间相和上层水相，水相约占TRIzol体积的60%。
6．转移上清于另一个Rnase-free的50ml离心管中。根据表2加入适量异丙醇，-20ºC沉淀1小时以上。
7．4ºC,12000g离心10分钟。
8．去上清，据表2加入适量体积的75%的乙醇混匀。
9．4ºC，7500g离心5分钟。
10．去上清，空气中干燥或真空抽干RNA沉淀，但不要太干。加入适量体积的DEPC-WATER,溶解沉淀。
取少量RNA用于测定其OD值和电泳，其余置-80ºC冰箱中保存

组织量	TRIzol Reagent	氯仿	异丙醇	75%乙醇
50~100mg	1ml	0.2ml	1ml	1ml

二.mRNA的分离
1.Oligotex mRNA Kits  (QIAGEN）法 
 准备工作：
1.将Oligotex Suspension 置于37℃水浴中，旋转混匀，溶解Oligotex.,然后置于室温。
2.将OBB Buffer置于37℃水浴中，旋转混匀，重溶沉淀物，然后置于室温。
3.将OEB Buffer 置于70℃水浴中，待用。
 
试验步骤：  
表3：加入试剂量据此表

Total RNA	RNase-free Water to:	Buffer OBB(ul)	Oligotex Suspension  (ul)	Prep size
<=0.25mg	250ul	250ul	15	Mini
0.25-0.5mg	500ul	500ul	30	Midi
0.5-0.75mg	500ul	500ul	45	Midi
0.75-1.00mg	500ul	500ul	55	Midi

1.TotalRNA量不要多于1mg，用移液器取出所需RNA量到1.5ml离心管中，加RNase-freewater补足到500ul
2.根据表3加入适当体积的OBBBuffer和OligotexSuspension，轻弹1.5ml离心管彻底混匀
3.置于70℃水浴中3min

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