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HIV RNA定量测定(病毒载量测定)标准操作规程(SOP)
作者:未知 来源:生物秀 时间:2007-7-14

    5.3 仪器和材料的专用制度
    仪器、设备、材料、设施均应按工作区域进行标识,不得交叉混用。
    5.4 单向流向制度
    5.4.1 实验材料,包括:样品及其扩增产物、实验器材(容器、板架、个人护具)、试剂、记录纸、笔、清洁材料等,只能从扩增前区流向扩增后区,即从试剂准备区→样品处理区→扩增区→扩增产物分析区,不得逆向流动。
    5.4.2 实验室的气流也应从扩增前区流向扩增后区,不得逆向流动。
    5.4.3 尽量减少人员由扩增后区返回扩增前区的频度。
    5.5 废弃物处理制度
    5.5.1 所有废弃物应按照HIV污染物品处理。
    5.5.2 由专人按特定程序和方法进行清洁和消毒。
    5.6 质量控制和评价
    5.6.1 制订质量保证计划,包括内部质量控制和参加室间质量评价的程序。
    5.6.2 建立内部质量控制制度,每次需加入不同浓度的标准对照。
    5.6.3 定期接受室间质量评价。

    6 HIV核酸定量检测的意义
    6.1 辅助诊断
    在一般情况下,HIV抗体检测足以对HIV感染与否做出正确诊断,但在特殊情况下,单纯抗体检测不足以完成明确的判定,如出现某些非典型的抗体反应形式,特别是不确定反应时,RNA的测定可提供非常有用的证据。虽然单纯使用RNA测定不能完全确定感染与否,但当RNA测定出现较高拷贝数的阳性结果时(>3,000c/ml),感染发生的可能性非常大。
    需要指出的是,每一种RNA定量系统都有其最低检测限,即可以测出的最低拷贝数,通常在50100c/ml以上,RNA定量检测时未测出不等于样品中不含有病毒RNA。另外,许多AIDS病人/HIV感染者在接受抗病毒治疗后其病毒载量可降至非常低的水平,还有少数HIV感染者在感染后长期处于病毒水平非常低的状态,进行RNA测定时往往测不出来。因此,使用此指标应综合其它检测数据和样品背景情况进行综合判断。
    6.2 早期诊断
    在HIV感染的窗口期无法使用抗体检测进行诊断。而在感染早期,在抗原峰出现前后通常出现一个病毒载量的高峰,此高峰通常高于发病时的血浆病毒水平,并且有证据表明这个时期的病毒具有很高的感染能力。这个高峰在免疫系统产生反应后,尤其是在细胞免疫出现后开始下降。因此早期病毒RNA测定具有特殊的意义。该方法也可用于HIV感染孕妇所生婴儿的早期辅助诊断。
    目前国际上正在尝试使用这种检测对采供血样品进行多个样品混合后的RNA检测以减少窗口期危险(降低“残余危险度”)。
    6.3 病程监控
    根据HIV感染发生后病毒载量具有一定的变化规律,并且这种变化与疾病的进程有着密切的相关性。因此定期进行病毒载量的检测有助于确定疾病发展的阶段,以确定相应的治疗方案。
    通常在HIV感染后无症状期内发生的感染或其它临床症状很难与AIDS发病时的症状区别,为确定一个刚发生的症状是否与HIV的感染有关,医生往往需要观察病人的实验室指标,病毒载量就是一个非常重要的指标。
    6.4 指导治疗方案及疗效判定
    临床实践证明,并非在任何情况下HIV感染者都应该进行抗病毒治疗。这不单是经济上的原因,更重要的是由于抗病毒药物的副作用和疗效原因。通常在病毒载量达到一定水平后(如>35,00050,000c/ml)抗病毒治疗才具有良好的效果。
    在进行治疗后,通过病毒水平的检测才能确定治疗是否有效,通常在治疗前后病毒水平降低0.5 log以上才被认为临床有效。
    6.5 预测疾病进程
    HIV感染后疾病进程与病毒载量的关系十分密切,观察HIV感染者病毒RNA水平可大致预测其发病的可能。病毒载量与6年发病率的关系为:<500c/ml时5.4%;5013,000c/ml时16.6%;3,00110,000c/ml时31.7%;10,00130,000c/ml时55.2%;>30,000c/ml时则为80%。
    当HIV感染者CD4+T细胞计数<200/μl时,病毒载量与36个月发展至AIDS的危险为:<10,000c/ml为4.9%;10,00029,999c/ml为12.7%;30,00099,990c/ml为17.7%;>100,000c/ml为22.4%。在CD4+ 细胞数相同的情况下,年纪大的比年轻患者发展至AIDS的危险更大(AIDS 2004;18:51-58.)。

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