1胆汁采集方法
禁食12h，3%戊巴比妥腹腔注射麻醉后，行胆总管插管术。将家兔仰卧并固定于实验台上，清洗腹部、备皮、消毒、铺巾，自剑突下取腹部正中切口约3cm开腹，找出并游离胆总管，在胆总管远端靠近十二指肠膨大处剪开小切口，将引流管向上插入约2cm，用丝线结扎固定后关腹。待胆汁引流通畅，留取空白胆汁标本后，按实验设计静脉注射各待测抗生素，各抗生素用量根据临床上人体的用药量，按标准动物等效剂量折算法计算（头孢曲松75mg/kg，头孢哌酮75mg/kg，哌拉西林300mg/kg，美罗培南75mg/kg，左氧氟沙星25mg/kg和甲硝唑40mg/kg），给药结束后0.25、0.5、0.75、1、1.5、2、3、4、6、8h等不同时间分别收集胆汁1.5ml,低温保存（-20℃）。
2 药物测定方法学 均采用高效液相色谱法（HPLC）测定胆汁样品中抗生素浓度。
2.1 色谱条件
（1）头孢曲松：色谱柱：Spherisorb ODS Sm C18, 5μ,150×4.6mm；流动相：0.8%四庚基溴化铵乙腈溶液-水-磷酸盐缓冲液(取磷酸氢二钾13.6g和磷酸二氢钾4.0g，溶于1000ml水中，调节pH=7.0) –枸橼酸盐缓冲液（取枸橼酸钠25.8g,置1000ml量瓶中，加水500ml使溶解，用20%枸橼酸溶液调节pH至5.0，加水至刻度）（500：440：55：5）；流速：1 ml/min；检测波长：254nm；进样量：20l ；柱温：25℃。
（2）头孢哌酮：色谱柱：Nova-Pak C18 60A 4μm,3.9×150mm HPLC Column；流动相：0.005mol/L四丁基氢氧化铵溶液(取10%四丁基氢氧化铵溶液26.4ml，加水800ml，用1mol/L磷酸溶液调节pH至4.0，加水稀释至2000ml，摇匀)-乙腈（750：250）；流速：1 ml/min；检测波长：220nm；进样量：20l ；柱温：25℃。
（3）美罗培南：色谱柱：Waters Symmetry® C18, 5μ,4.6×150mm；流动相：乙腈-0.05mol/L磷酸二氢钾（pH=6.5，4：96）；流速：1.5 ml/min；检测波长：300nm；进样量：20l ；柱温：22.5℃。
（4）哌拉西林：色谱柱：DiamonsilTM C18 5μm,200×4.6mm；流动相：甲醇-0.01mmol/L磷酸二氢钠（pH6.5）（55：45）；流速：1.0 ml/min；检测波长：220nm；进样量：20l ；柱温：20℃。
（5）左氧氟沙星：色谱柱：Agilent Hypersil ODS C18, 5μ,4.0×125mm；流动相：0.02mol/L磷酸盐缓冲液（pH2.44）-甲醇-0.5mol/L四丁基溴化铵（70：25：5）；流速：1.0 ml/min；检测波长：294nm；进样量：20l ；柱温：30℃。
（6）甲硝唑：色谱柱：Nova-Pak C18 60A 4μm,3.9×150mm HPLC Column；流动相：磷酸二氢钠（0.0075mol/L）-甲醇（80：20），用磷酸调节pH至4.0；流速：1.0 ml/min；检测波长：320nm；进样量：20l ；柱温：25℃。

2.2 对照品溶液的配制
分别称取头孢曲松钠、头孢哌酮、哌拉西林、美罗培南、左氧氟沙星、甲硝唑对照品59.46mg、53.82mg、55.25mg、11.41mg、10.29mg、11.05mg，各置于10ml棕色容量瓶中，以流动相溶解、稀释至刻度，充分摇匀，分别得5.0mg/ml或1.0mg/ml的储备液母液，再根据需要配制成各抗生素不同浓度的标准储备液。

2.3 胆汁预处理
取各胆汁标本200l，加入相应流动相或乙腈至2ml，旋涡振荡，离心（15000 rpm ）10min，取上清液经微孔滤膜过滤后进样。

2.4 专属性试验及色谱行为
各组样品均取空白胆汁、对照品溶液、空白胆汁加对照品溶液、动物静脉注射该抗生素后的胆汁等4种试样，按上述胆汁预处理方法操作，色谱图均要求在此条件下，分离效果良好，无内源性物质干扰。

2.5 标准曲线制备
分别取空白胆汁加入各抗生素标准储备液，头孢曲松成为相当于胆汁浓度分别是2500、1000、500.0、250.0、100.0、50.0、25.0μg/ml的浓度系列；头孢哌酮成为相当于胆汁浓度分别是2500、1000、500.0、250.0、100.0、50.0、25.0μg/ml的浓度系列；哌拉西林成为相当于胆汁浓度分别是5000、2500、1000、500.0、250.0、100.0、50.0、25.0μg/ml的浓度系列；美罗培南成为相当于胆汁浓度分别是500.0、100.0、50.0、25.0、10.0、5.0、1.0、0.5μg/ml的浓度系列；左氧氟沙星、甲硝唑各成为相当于胆汁浓度分别是100.0、50.0、25.0、10.0、5.0、2.5、1.0μg/ml的浓度系列；按前述胆汁预处理方法处理后进样，采用外标法峰面积定量。结果以样品浓度（C）对样品峰面积（S）进行线性回归，得标准曲线及回归方程：S=bC+a。

2.6 回收率试验和精密度试验
分别取空白胆汁加入各种抗生素标准液，使各成为高、中、低三个不同浓度的该抗生素的标准胆汁样品各5份，按前述方法处理后进样，以胆汁样品峰面积计算在不同浓度时该药物在胆汁中的回收率。同上法配制各抗生素的高、中、低三个浓度的胆汁溶液各5份，在同一天内进样分析，测得相应药物各种浓度的实测值，计算其日内的变异系数（相对标准偏差RSD），即为日内精密度；其余样品置-20℃冰箱内保存，此后在不同天同法测定各药物的高、中、低三个浓度的胆汁样品，计算日间精密度，以此考察测定方法的符合程度。

2.7胆汁药物浓度和药动学数据处理
根据各抗生素胆汁样品进样检测经外标法定量的峰面积，通过该药的标准曲线回归方程，计算其相应的药物浓度。所得胆汁药物浓度－时间数据用上海宏能药动学软件进行房室模型及非房室模型——统计矩分析，得出各种抗生素在胆汁中相应的药代动力学参数，如药物峰浓度、峰时间、半衰期、清除率、表观分布容积等。所得数据用均数±标准差（ ）表示。

2.8结合抗生素药效学的抗菌活性指标――最低抑菌浓度(MIC),进一步评估药物在胆汁中的杀菌效力
抗生素的药动学/药效学(PK/PD)研究显示，药物的杀菌作用取决于峰浓度(Cmax)和药物与细菌的接触的有效时间。目前用于评价抗生素杀菌作用的PK/PD参数主要有杀菌指数(抗生素峰浓度和最低抑菌浓度的比值,Cmax/ MIC)和抗生素浓度大于最低抑菌浓度的时间 (T＞MIC)等。根据各抗生素在胆汁中的药峰浓度和不同时间的实际浓度与抗生素的抗菌活性指标――最低抑菌浓度(MIC)结合,得出抗生素的Cmax/ MIC和T＞MIC，评估其在胆汁中的杀菌效力。
需氧菌对各抗生素的MIC数据摘自李家泰主持的中国细菌耐药监测研究组对我国不同地区的多中心的细菌耐药监测结果，甲硝唑对厌氧菌的MIC值摘自戴自英主编的实用抗菌药物学。