4. 显色
[1] HRP 催化底物的一步呈色反应，同样需要一定的时间和温度，
[2] 一定要按照说明书规定的时间温度（一般为37°C，10-15 分钟）恒定反应后终止
[3] 或根据临界值质控血清吸光度值达0.2 左右使的时间而恒定反应时间.
5. 酶标仪判读结果
1.显色反应终止后应立刻比色（30 分钟内）。
2.常见的显色系统有OPD 和TMB 二种，以后者最为常见，而TMB 酸不易终止因此必须尽快比色以免影响结果。OPD 终止后显棕色，测定波长为490nm；TMB 终止后显黄色，测定波长为450nm，二种底物的校正波长均用630nm。
3.使用双波长的优点可以消除反应板条上的划痕手印的干扰。同时要注意反应板应用纸吸干后才能置酶标仪中比色，否则吸光度易出现负值或损坏滤光片。
【分析后质控】
【报告方式】
1.定性试验：国内外为便于统一计算，一律按S/COV 方式报告，S 为标本A 值，
COV 即Cut Off 值（或COV）
[1] 夹心法和间接法以S/COV≥1 为阳性；竞争法与中和法以S/COV﹤1 为阳性
[2] COV 的计算公式以试剂盒说明书的为准常见的有：
A） COV=2.1×N（当N 不足0.05 时按0.05 计），此公式由P/N>2.1 换算而来，常用于夹心法。
B） COV=0.5×N，从抑止率公式换算而来，常用于竞争，中和法。
C） COV=N+C（C 为常数），用于间接法。
D) COV=C×P+N（C 为常数），用于间接法。此公式最客观，但对厂家要求很高，阴阳性对照测定值要基本恒定。
2.定量分析：严禁用定性试剂盒做定量分析。
[1] 用已知量的系列标准品，绘制标准曲线，结果以绝对量或单位表示。ELISA的标准曲线每次都要和待测标本做在同一块板上。
[2] 现有的ELISA 定量试剂盒标准曲线只有在较窄的浓度范围内成直线，要得到精确的结果实属不易。
【记录】
[1] 所有实验的原始资料均应存档；所有的记录均应规范登记在册；原始登记表应记录试剂来源、批号；质控血清的来源及测定值并注明是否在控；签上实验者姓名及审核者姓名。
[2] 如试验结果对临床诊断有决定意义，其样本应保留，至少与病历保存期一致
【定性试验】
ELISA 定性试验的临床意义在于是否检出病原体，与检出量无关，因此QC要保证试验的灵敏度和特异性。生化的质控图方法仅能观察灵敏度而无法监控特异性。建议使用临界值血清界定法：将试剂盒所设的阴阳性对照作为内对照指示反应；另设临界值、高值质控血清，正常人血清作为外对照，与标本同时检测，临界值S/C.O≥1，高值质控血清S/C.O≥10，正常人血清A 值在0.05~0.07 之间。
阳性质控血清失控（临界值为灵敏度，高值为"HOOK"效应监控）应重做阴性标本；阴性对照失控应重做阳性标本。以表格式记录每块板的外对照实验结果，作为QC 资料存档。
【定量试验】
ELISA 定量试验常见于肿瘤因子（如AFP，CEA，CA 系列），激素类，免疫球蛋白类，这些物质在体内有一定的量（正常范围），超出这个量才呈病理情况，故需定量测定。定量试验的质控方法可参考生化方式。
【"即刻性"质控】
在开始进行质控时，只需要有3 个质控血清测定值即可进行质控。当这组数据扩大到20 次有效值时就可以计算RCV 的X，s。方法：
1. 先将测定值从小到大排列，X1 最小，Xn 最大；
2.计算X 和s；
3.计算SI 上限值和下限值。SI 上=（X 最小-X）/S， SI 下=（X 最大-X）/S
4.对照SI 表，检查是否出控，SI 上、下限≤规定值，在控；SI 上或下限>规定值，失控。
