2 适用范围：DNA基因分型实验室
3 依据：DNA凝胶电泳标准化操作规范
4 引用文件：德国BAG公司（以下简称BAG） 《Instructions for use Instructions for use HISTO TYPE/DNA-ABDR 384》
5 程序
5.1试剂准备
5.1.1 琼脂糖（西班牙产，国内分装）
5.1.2 5×TBE（Tris-硼酸缓冲液） （0.445M tris-borate, 0.0125M EDTA）
54g Tris（羟甲基）-氨基甲烷（base）
27.5g 硼酸（H3BO3）
4.65g Na2-EDTA
加入灭菌水定容至1000ml，室温保存。
5.1.3 溴化乙锭溶液（10mg/ml）
将100 mg的溴化乙锭溶解于10 ml的蒸馏水中，在2--8℃的条件下避光保存。
注意：EB为强致癌物质，使用时要小心，不可直接用手接触胶。
5.1.4 0.5×TBE（ Tris-硼酸缓冲液）
用蒸馏水将5×TBE缓冲溶液稀释10倍。
5.2 仪器及用具准备
5.2.1 16道可调加样器（0.5—10ul）和单道可调加样器（0.5—10ul）：配有一次性吸头和活塞的正相排液器。
5.2.2 微锅炉一台、微锅炉专用手套一只、250ml三角瓶若干、100 ml的量筒一个
5.2.3 可以提供500V和200mA的电泳仪一台和电泳槽若干
5.2.4 紫外成像仪和配套电脑
5.2.5 电子天平（0---500克）一台
5.3.1.1 从工作服衣柜中换取专用工作服，戴上适应自己手形的乳胶手套。有条件的实验室，可以外加一次性口罩、一次性工作服等。
5.3.2 凝胶制备
5.3.2.1 打开电子天平开关，自检通过后，调零；放上一张纤维薄纸。准确称取琼脂糖干粉2.0克，尽量使琼脂糖干粉在瓶底，将其转移至250ml的三角瓶中。
5.3.2.2 使用100 ml的量筒，量取100 ml的0.5×TBE电泳缓冲液，加入到称取琼脂糖干粉的三角瓶中，轻轻摇动，使干粉在溶液中混合，放到微锅炉中加热至熔化。要求达到溶液中不存在小透明体或半透明体的悬浮。加热过程中带上手套不时地小心旋转三角瓶以保证粘在壁上的未熔化的琼脂糖进入溶液。要查看煮沸的溶液体积是否由于挥发而减少，如有必要可加TBE复原。注意：加热时间太长，琼脂糖溶液会变的过热而爆沸。
5.3.2.3 用手套取出三角瓶，待熔化的凝胶稍冷却（不很烫手）后，使用微量加样器吸取2ul溴化乙锭，在离熔化的凝胶较近的三角瓶内壁轻靠，使溴化乙锭溶液沿瓶壁流下，轻轻地旋转以充分混匀凝胶溶液。
5.3.2.4 琼脂糖溶液在冷却过程中，将电泳槽放于一平整桌面上，使电泳槽的正极在操作者的左手边，负极在操作者的右手边，插紧两片间隔片。
5.3.2.5 浇灌温热的琼脂糖溶液进入电泳槽，凝胶厚度3—5mm,融化的凝胶中的气泡可用有尖角的硬物轻触，将其除去。
5.3.2.6 盖上模具梳子，使梳子间距较宽地一端靠近电泳槽的正极，轻轻按紧梳子，盖紧，保持四角在同一平面上。
5.3.2.7 室温下放置30—45min，让凝胶溶液完全凝结。
5.3.3 加样电泳
5.3.3.1 检查待电泳的384干板是否有干孔现象，并作记录；检查待电泳的384干板板上所写样品号是否清晰可见，并作记录，如有模糊的查找扩增记录来确定。
5.3.3.2 待凝胶溶液完全凝结后，小心拔出梳子，取出电极两端的间隔片；向电泳槽中加入0.5×TBE电泳缓冲液，刚好没过凝胶1mm.。
5.3.3.3 将16道可调加样器调到4ul，并保持加样器的枪头在一条直线上，且间隔相等。
5.3.3.4 从384干板中依次取4ul的扩增液，缓缓加入靠近负电极的凝胶的孔中，保证所有枪头进入凝胶孔中，不可戳穿凝胶；要求扩增液完全加入孔中，避免溢出污染临近孔中样品。用阳极池内缓冲液充分洗涤移液器枪头后，可以反复加样，不需换枪头。
5.3.3.5 加样完成后，盖上电泳槽的盖，接好电极插头，如电极插头连接正确，两极由于电解作用产生气泡，保持电压150V左右。
5.3.3.6 按照加样的顺序，将每个样品的编号写在粘贴纸上，先粘在对应的电泳槽盖上。待蓝色染料从加样孔迁移至两个加样孔的中下1/2—2/3处时，即可停止电泳，取下电泳槽盖，倒去电泳缓冲液，将电泳槽盖上的洋品号对应的移至凝胶上的样品上，以便识别。
5.3.4 照相记录结果
5.3.4.1 及时将凝胶拿到紫外成像仪中，在紫外灯下成像，要求图片中的条带清晰可见。核对凝胶图片中的样品编号与板上的样品号无误后，照相并打印图片，做好原始电泳记录。
5.3.4.2 取出凝胶，将其放入专用的垃圾袋中，防止污染。
注意：尽量保证此实验室的物品不要与其他实验室的物品相混用。
