流感病毒鸡胚分离标准操作规程
材料：鸡胚10日龄
照卵灯
70%酒精
针头, 22 号, 1½ 英寸
1ml注射器
鸡卵开孔器
胶水或清漆
15ml 管和架子
10ml 移液管
无菌镊子
方法：（所有有关病毒分离的操作都应在生物安全Ⅱ实验室中进行，必须遵守生物安全规定，严格执行标准操作规程和废弃物管理规定。进入生物安全Ⅱ实验室要求着必要的个人防护用品：穿工作服、工作鞋、戴帽子、口罩和防护眼镜）
程序：
I.验卵
1、用照卵灯检测鸡胚，并将鸡胚的盲端放置在蛋盘上。
2、如果鸡胚是没有受精、有裂痕、发育不全、或表面有好多渗水孔，应掉。
II.鸡胚接种
1、将鸡胚的盲端放置在蛋盘上，标记每个鸡胚用特定的鉴定数量（通常每个样本接种3个鸡胚）。
2、用70%乙醇消毒鸡胚，在气室端钻孔。每份标本接种3个鸡胚。
3、用注射器吸1ml处理过的临床标本，装上22 号（ 1½ 英寸）针头。
4、将鸡胚置于蛋架上，用短促动作刺破鸡胚羊膜，将100 µl临床标本注入鸡胚羊膜腔。将针头退出至½ 英寸，将另外100 µl临床标本注入鸡胚尿囊腔。
5、用同一注射器和针头将同一标本依上法接种另外的两枚鸡胚。
6、将针头弃于合适的生物安全装置中。
7、滴石蜡或胶水封口。
8、33-34℃温箱培养鸡胚2-3 天。
提示：禽流感需35 ℃or 37℃培养，哺乳动物流感病毒35℃培养（禽流感在35ºC也会生长良好！）
III.鸡胚收获
1、鸡胚在收获前应4℃过夜或至少放置4小时。
2、标记15ml 塑料管与相应的鸡胚编号一致。用70%乙醇消毒鸡胚顶部。
3、用无菌镊子撕破鸡胚气室蛋壳，推开鸡胚尿囊膜。用10ml 吸管吸鸡胚尿囊液置于相应的收集管中。用注射器和针头刺破鸡胚羊膜，尽量吸取羊水放置于另外的管中。由于羊水较少可以将3个鸡胚的羊水合并。
4、将鸡胚收获液3000转离心5分钟去除血液和细胞。进行红细胞凝集实验并4℃孵育30分钟。如没有红细胞凝集现象在报告不能从样品中分离病毒前，应再鸡胚传代2次。
5、如果有必要，应3000转离心5分钟以去除剩余的细胞。通过血凝抑制实验鉴定分离物，并在收获的一天间将分离物保存在-70℃条件下。
注意事项
I.不要在-20℃条件下保存病毒分离物，应该温度条件下流感病毒极不稳定。
II.流感病毒实验室毒株和临床检测样本的交叉污染问题：流感病毒操作要求生物安全规程。当在同一工作区域内操作临床样本和已知流感病毒时应该有特殊警示。有些实验室用已知的病毒作为阳性控制，而且有将商用推荐病毒作为质量确证程序。这些病毒由于其极优的生长特性被选择出来。因此这些毒株常与临床检测样本发生交叉污染。最好在流感流行季节前准备该类病毒。如果在此期间必须补充这类病毒的话，必须与处理临床标本的时间分开。应尽量将已知病毒和未知材料在不同时间、不同生物安全柜、不同房间进行操作。
III.实验室污染的鉴定：由于试验室已知毒株和商用推荐病毒都是实验室适应的，有良好的生长特性，通常滴度较高。用推荐血清做抗原分析和基因序列分析可以确定污染状况。
重要原则：
禁止在同一实验室，同一时间处理接种未知临床标本和已知标准病毒。
禁止在同一实验室，同一时间处理接种采自不同动物的标本；动物标本（如猪、禽等）必须与人的标本分别保存。
