细胞培养抗生素
1.细胞库之细胞培养基不加抗生素
1.1.培养自ATCC引进之细胞株，培养基中不加抗生素。
1.2.培养自其它实验室引进之细胞株，制作tokenfreeze前培养基须添加抗生素，待tokenfreeze通过污染测试后，大量培养时则不加抗生素。
2.寄送活细胞时，须将培养液充满整个flask时，则须添加抗生素(penicillin100units/ml+streptomycin100ug/ml)。
3.若要检测mycoplasma，则培养基内不可添加gentamicin，因gentamicin会抑制
mycoplasma生长。
4.去除细菌污染之抗生素混合配方:penicillin250units/ml,streptomycin250ug/ml,neomycin250ug/ml,bacitracin2.5units/ml，注意混合使用后药物毒性会增强。
5.抗生素使用种类与浓度：
工作浓度储存温度杀灭细菌
penicillin 100 units/ml-20℃G(+)bacteria
streptomycin 100 ug/ml-20℃G(+)andG(-)bacteria
chlotetracycline 50 ug/ml-20℃G(+)andG(-)bacteria
gentamicin 50 ug/ml-20℃G(+)andG(-)bacteria,mycoplasma
amphotericin B 2.5 ug/ml-20℃yeastandmolds
nystatin 50 ug/ml-20℃yeastandmolds
fungizone 2.5 ug/ml-20℃yeastandmolds
细胞培养培养基
1.液体培养基贮存于4℃冰箱，避免光照，实验进行前放在37℃水槽中温热。
2.液体培养基(加血清)存放期为六个月，期间glutamine可能会分解，若细胞生长不佳，可以再添加适量glutamine。
3.粉末培养基配制(以1升为例)：
3.1.细胞培养基通常须添加10%血清，因此粉末培养基之配制体积为900ml，pH为7.2-7.4。NaHCO3为另外添加，若将NaHCO3粉末直接加入液体培养基中会造成pH之误差，或局部过碱。因此粉末培养基及NaHCO3粉末应分别溶解后才混合，然后用CO2气体调整pH，而非用强酸(HCl)或强碱(NaOH)，因为氯离子对细胞生长可能有影响，且贮存时培养基的pH易发生改变。
3.2.材料：
3.2.1.纯水(milli-Q水或二次至三次蒸馏水，水品质非常重要)
3.2.2.粉末培养基
3.2.3.NaHCO3(SigmaS-4019)
3.2.4.电磁搅拌器
3.2.5.无菌血清瓶
3.2.6.0.1或0.2mm无菌过滤膜
3.2.7.pHmeter
3.2.8.真空帮浦
3.2.9.CO2气体
3.3.步骤：
3.3.1.取粉末培养基溶于700mlmilli-Q水中，搅拌使其溶解。
3.3.2.称取适量之NaHCO3粉末(数量依培养基种类而异，表一)溶于200mlmilli-Q水中，搅拌使其溶解，然后通入CO2气体至饱和，约3-5分钟。
3.3.3.将溶解且含饱和CO2之NaHCO3溶液加入溶解之液体培养基中混合。混后溶液之pH应为7.2-7.4，除非pH值偏差太大，否则不需用酸碱再调整之。
若为太碱，可再通入CO2气体调整pH。培养基以真空帮浦通过过滤膜时，pH会升高0.1-0.2。
3.3.4.以0.1或0.2mm无菌过滤膜过滤灭菌，同时分装至无菌容器中，标示培养基种类、日期、瓶号等，贮存于4℃。(血清亦可加入培养基中一起过滤)
3.3.5.配制之培养基配制须作生长试验与污染测试。
4.配制培养基之生长测试
4.1.材料：
4.1.1. MDCK cell (ATCC CCL-34 或CCRC 60004)
4.1.2. 6-well TC plate (or 35 mm TC dish)
4.1.3. methanol
4.1.4. glacial acetic acid
4.1.5. 10 % Giemsa solution (GibcoBRL 10092-013)
4.2.步骤：
4.2.1.以待测试培养基培养MDCKcell，接种MDCK细胞于6-wellplate(或35mmTCdish)中，每个well接种1×102活细胞，同时作对照组实验。
4.2.2.接种5～7天后，在100倍倒立显微镜作观察细胞群落之生长，待细胞群落大到可以肉眼观察，而群落间不互相接触时即可。
4.2.3.去除培养基，加入1mlCarnoy’s固定液(甲醇：冰醋酸﹦3:1)，室温下静置10min。
4.2.4.去除固定液，水洗二次。
4.2.5.加入1ml10%Giemsasolution，，室温下静置染色2-3min。
4.2.6.去除染液，水洗二次。
