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中台科技大学医学生物科技研究所无菌室使用规则与手册
作者:未知 来源:生物秀 时间:2007-7-9

    实验桌使用注意:实验室人数大于实验桌数,要及时清理桌面上的东西以方便别人临时使用。同样,使用了别人的实验桌就一定要将之打扫干净。
    PCR须知:定期用50%的酒精擦PCR上的样品孔,看好时间做实验,为了仪器寿命,不能让PCR仪4℃保温过夜。PCR的技术深不可测,每个人都要潜心研究,特别是污染的防止。Taq酶、dNTP都有储备,找相关的管理人员(洪洁、章宏海)要,然后妥善保存,不要用别人的备份以避免污染。
    感受态:制备高效率的感受态,是保障研究工作正常进行的前提。每个人都应该定时活化工作菌株,每天接种一管大肠杆菌以备用。经常用pUC或pSK质粒检测转化效率,一旦发现转化效率下降就马上更换。制备感受态细菌的培养器皿一定要极力避免洗涤剂的使用。
    试剂称量须知:从冰箱中取出来的固体试剂必须在37度温箱中加温,等试剂的温度高于室温后方能打开盖子称量;称毫克级试剂时,一次性往Eppendrof管中取出适当的量,称重后就按重量进行计算该加入溶剂的量。
    冰箱、冷库使用须知:一般在各自划定的区域内使用-20℃冰箱(特别是卧式)时,将自己的盒子取出后再挑选,切勿长时间开着冰箱门影响别人样品质量。定期整理各自使用的冰箱区域,腾出试管架子。
    限制性内切酶的酶切反应需在37℃培养箱中进行(整体加热),这样做是为了避免水分凝结在管盖上导致反应液中离子浓度偏高。贵重酶要尽量节省用量。
    精密移液器(Pipetman)的正确用法:Pipetman不得在酒精灯上操作,不要习惯性空打(会造成磨损)。
    离心机使用时:Hitachi高速离心机用后需将转子取出倒置。最重要的是,不管什么离心机,一定要将离心管进行平衡,不然离心机轴心会在一次不经意的不平衡后,发生永久性偏轴损伤。
    带可调控性电源(电压和电流)仪器使用时,需将电压或电流调至零点方可以关电源。这样的仪器有:离心机、显微镜、电泳仪等。空调使用时应该注意不要经常开关,因为每次启动制冷相当于3小时的持续制冷的损伤;实验室日光灯应该保持一直开的状态,主方可保证最长寿命。
    Agarose凝胶倒好后不及时用时,需在1小时内转移至TAE中保存。

    带盖的离心管、试剂瓶等在进行高压灭菌时,需将盖子拧松或者在瓶口插一片纸;带徒弟时必须在第一课讲解灭菌要领。
    废液回收:尽可能减少酚氯仿抽提时酚氯仿的用量,废液要回收。其他需要回收的废液:乙酸乙脂、吡啶、乙醚,及其他不溶于水的有机溶剂。
    电泳仪和台式离心机需将电压调至最小后再关闭电源,这是为了让仪器长寿。
    脱色摇床,培养摇床不用时要关闭(电机有使用寿命),不用的器皿、管子及时拿出。
    实验服只能在实验区穿,不能穿出实验区,也不得穿入生活区。
    浴室用后要打扫,将滤盖上的头发除去,将地板上的水除去。
    实验室书籍尽可能不带离实验室。

    六、其他

    对于实验室的集体活动之一的Lab meeting,每个成员必须准时出席,一般三年级以上当每周做工作汇报。
    Seminar是实验室最重要的学术活动,每个成员必须最大限度加以重视,努力提高演讲水平。Ppt文件要存档;
    实验室提倡大家多参加各种学术会议,并要积极提问题。
    实验室旅游也是集体活动的一部分,实验室成员当尽量单独参加(特殊情况特殊处理)。
    实验室内互相转告事情,碰到对方不在时,马上找来纸和笔写条子留在当事人的桌上。这是为了避免你的健忘可能会带来的灾难。

    一.发展概况
    组织培养(Tissueculture)是在体外模拟体内生理环境,在无菌、适当温度和一定营养条件下。使从体内取出的组织生存、生长繁殖和传代,并维持原有的结构和功能特性。广义的组织培养与体外培养同义。体外培养(Invitro)包括所有结构层次的培养,即:组织培养、细胞培养和器官培养。
    所谓细胞培养(Cellculture)是指细胞包括单个细胞在体外条件的生长。
    组织培养的发展史已有近百年,最初的组织培养是胚胎学和微生物学的引申,建立于无菌原则上,用天然体液(如胎汁、血浆)来维持从整体切下的组织块,对细胞进行形态和功能的观察。
    通过许多学者大的改进和革新,培养基由天然动物血浆改为合成培养基,促进细胞生长物质从胎汁改为动物血清。现在全世界贮存的细胞约有万种以上。组织培养不仅是细胞生物学必需的技术,也是分子生物学、肿瘤学、遗传学和免疫学等学科必要的方法。

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