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中台科技大学医学生物科技研究所无菌室使用规则与手册
作者:未知 来源:生物秀 时间:2007-7-9

    二、课题、工作时间和假期

    研究生的课题选择分两种情况:出于实验室的发展需要而需要进行的课题;围绕人类重大疾病选择自己喜欢而实验室又能支撑的课题。
    按照国际惯例,研究生原则上没有寒假和暑假。本实验室允许大家在安排好工作的基础上适当休假,但寒暑假休假实验室不发工资。
    本实验室采用柔性工作时间制,但除非有特殊理由,每天到实验室的时间不得晚于10:30am。长时间外出,需要适当说明和请假。

    三、实验室安全须知

    实验室的安全问题关系到每个人的切身利益。实验室危害源按大小区分如下:放射线、病毒>>氯仿>EB/acrylamide>臭氧。
    放射性元素本实验室不使用,因此不必担心。将来做同位素实验,需要接受王维荣老师(本实验室同位素实验上岗证持有者)的安全指导;
    特别需要关注的是氯仿,会导致肝肿大、肝硬化,如果瓶子的内塞不盖,会不知不觉中挥发,不知不觉中实验室所有人都吸入了氯仿。新开瓶的氯仿要在上面加上0.5cm厚的离子水,防止氯仿挥发。
    本实验室所从事的研究范围内的病毒属于安全系数较高的范畴,但对于出实验室的样品和导入下水道的废液,需要严格灭活处理。处理方法:废液高温灭菌,器具NaOH浸泡)。
    EB在Amestest中显示有致突变活性,但实际上不能穿越表皮,因此即便沾在手上也危害甚微。如果浓度比较高,可以用次氯酸钠等氧化剂擦手。
    臭氧会导致肺气肿和肺纤维化,因此要尽量缩短开石英紫外灯的时间(只有石英灯管才会发生臭氧),并尽量避免吸入臭氧;
    向下水道倒废液,要注意将危害大的物质做适当处理:如考马斯亮兰染色液应该加入次氯酸钠将色素破坏后确认达到中和。

    四、实验记录

    实验记录目前在中国很不规范,但应该逐渐开始规范化。本实验室翻译的“Atthehelm”一书中有详细的描述,将是我们实验室的努力方向。目前可以做到的是,将任何细节都记录在实验记录本上,特别是和导师讨论后要记录讨论的时间和内容以及达成的共识。铭记――好记性不如烂笔头。
    实验记录本需要妥善保存,离开实验室时将记录本留在实验室。因此你所记录的东西应该让后面查阅的人能够看懂,不要使用自己的“暗语”和“记号”。
    本实验室成员独自开发过改良过的的实验protocol,当不怨其烦地进行整理,放在服务器的实验室工具箱中,以便其他人共享。

    五、实验室工作应该注意细则

    实验室的任何东西都有它最应该放的地方。切记,哪里拿的放回哪里。
    实验室区域划分:实验室分公用区域和个人实验区域。个人使用区主要为指定的实验桌和试剂架,指定的坐位,指定的4℃和-20℃使用区,冷库使用区;公用区域包括细胞室、大小摇床、大小离心机、PCR仪、称量区、HPLC室、动物箱、破菌机、成像系统、核酸电泳区和蛋白质电泳区、灭菌室、RNA实验区、冷库、生活区、浴室等。所有公用区需要保持清洁和空闲,不能因为个人样品不收拾而影响别人的正常使用。
    试剂是实验室的血液。任何试剂接近用完时,或有特殊试剂需求时,必须先向实验室负责试剂定购的人员提出,必要时向实验室负责人商量定购事宜。
    正确的标签,是保证实验室正常运转的最低要求。标签必须写明4个要素:试剂名称、浓度(及pH)、人名、日期。如果高温灭菌过,也请注明。严格禁止使用个人编号。只要是使用时间在一天以上,就要具体写清楚这4个要素。要像“小狗见了电线杆一样”,多多留下你的标签。强烈建议所使用的试剂一定要自己配。
    器皿洗涤:个人使用的玻璃和塑料器皿,需要各自负责清洗、凉干。玻璃器皿橱、灭菌室门、仪器室门要始终保持关闭状态。如果你相信只由你一个人使用的物品,可以存放在你自己的抽屉。
    细胞培养须知:细胞室负责人为闵太善老师,负责血清定购,培养基、培养皿等试剂的定购,培养箱加水等;新配培养要冻在-20℃,由闵太善分装并加入双抗后派分给大家(分装血清前也在血清中加入双抗),这样可以最大程度避免污染;进入细胞室一定要换鞋;培养室显微镜一般不要切断电源,只把照明亮度调小,这样做是为了延长灯泡的寿命;所有的培养皿上都需要写上自己的名字;做完实验要将所有物品进行清理,看到消毒棉花少了就进行补充;看到消耗品少了,及时告知小闵;由于做细胞实验人员多,地方小,大家一定要多互相关照,优先考虑有重要实验的成员的需要;发生霉菌污染,用抗真菌药物进行抑制,不要马上抛弃;多带口罩做实验,避免发生支原体污染;细胞室的打扫,由使用人员轮流进行(闵负责指挥)。
    使用层析载体时,一定要好好阅读有关资料,了解载体的性质。分离纯化蛋白质和核酸的层析载体多数是由可被微生物降解的材料做成的,因此每次层析后只要第二天不用,就应当用20%的酒精进行置换(这个条件下没有微生物可以生存)。层析柱不能为了保存就放到4度的冷库里去,不然拿到室温就会出现气泡;如果是ProteinA亲和柱之类的带蛋白质配体的层析柱,就应该一直在低温操作;如果低温保存的柱子需要搬到室温操作,就应该在最短时间内将柱子里的液体置换成室温的液体;中压和高压的层析柱一般常温保存,不要在低温保存;一旦在层析柱中出现气泡,最有效的解决办法就是将缓冲液用微波炉加热煮沸后迅速冷却,然后过柱,利用空气溶解度的差异来吸收载体中的气泡。

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