四、实验步骤：
① 安装制胶模具（教师演示，学生安装）
注意事项：a、在整个过程中要轻拿轻放，以免将玻璃板弄碎。
②制作分离胶(浓度10%)
分离胶配方(浓度10%):pH8.9 Tris-HCl溶液:0.8ml
分离胶PAG溶液:1.2ml
蒸馏水:1.6ml
10%TEMED:40μl
%AP: 40μl
将上述溶液充分混匀,立即全部倒入安装好的制胶玻板中,为使分离胶界面平整,可在倒入分离胶后约5min后在其表面沿高板缓慢均匀加入0.5ml蒸馏水并将电泳槽轻轻敲击桌面。再静置40min左右,让分离胶凝聚完全。
③制作浓缩胶(浓度2.4%)
浓缩胶配方(浓度2.4%):pH6.7 Tris-HCl溶液:0.42 ml
浓缩胶PAG溶液:1.25ml
40%蔗糖溶液:1.25ml
10%TEMED:30μl
10%AP: 30μl
将上述溶液充分混匀,在聚合完全的分离胶上,倒入浓缩胶,（注意在倒入浓缩胶前要去掉分离胶表层的水）同时插入梳子,直到溶液装满和梳子插平为止。再静置40min左右,浓缩胶聚合完全后为乳白色。
（注意事项：A、在整个过程中要将制胶模具垂直方在桌面上，不容许倾斜。B、充分混匀的（分离胶或浓缩胶）溶液应尽快用移液枪延高板的一侧慢慢加入胶板中
C、胶制作完成后，松开卡板取下橡胶皮，然后再用卡板卡紧胶板。要注意低板在内侧。）
④制样：取适量(2g)的马铃薯于研钵中,加1ml的PBS(磷酸缓冲液,pH7.4),于冰上研磨至匀浆状,收集在1.5ml的离心管中,在台式离心机中以8000rpm离心5min，取上清,即为粗酶提取液,其中含有所需的APX。另外,豆芽研磨可取4g左右,同样加入1ml的PBS。
⑤点样
在浓缩胶聚合完毕后,小心取出梳子,两拇指和食指捏住梳子的柄,其余三指顶住制胶框两侧,匀速地拔出梳子,然后向电泳槽中倒入预冷的电极缓冲液（原液要稀释10倍）,缓冲液要没过低板。
点样前,要对样品进行预处理,即把粗酶提取液与甘油溴酚蓝指示剂以4:1混合,用50μl的微量点样器吸取样品20μl,将点样器的针头小心插入到点样孔底部,慢慢注入样品,要注意防止漂样。
⑥电泳
点样完毕后,连接好导线(正负电极不要接反,红色为正极,黑色为负极),将电压调至70 V,当溴酚蓝标志线移至浓缩胶与分离胶分界处,将电压调至150V,电泳2-3小时,当溴酚蓝标志线刚好跑出胶板时,结束电泳。
⑦取胶
切断电源,取出缓冲液并低温保存,可重复使用2次。然后松开卡板，取出凝胶板,用解剖刀扁平部分插入玻板的一角(是分离胶的一角),轻轻撬去一块玻板,用刀切掉分离胶右下角以示点样顺序,轻轻撬起分离胶,使之滚入染色培养皿中。
⑧染色
APX染色步骤如下：先用自来水溶液润洗两遍,再加入30-40ml的染色液,室温下放置5-20min,至显色完全。
⑨清洗玻璃板、胶皮、电泳槽。
五、注意事项：
a、在整个清洗过程中要轻拿轻放，以免将玻璃板弄碎。同时，清洗玻璃板不容许用强酸、强碱以及酒精溶液，一般用清水加一点洗涤剂进行清洗，然后用除离子水或蒸馏水润洗。
b.在整个实验过程中，要注意实验安全，凝胶、联苯胺等试剂有毒，应戴乳胶手套或一次性手套操作。
c．在电泳过程中不允许用手去触摸电极缓冲液，以免触电。
附表1
