材料:
1.待检标本(抗原):正常人血清。
2.抗体:正常人血清的家兔免疫血清。
3.1.5%离子琼脂(系用巴比妥缓冲液配制的)
4.电泳仪
5.巴比妥缓冲液:
巴比妥1.84克
巴比妥钠10.3克
蒸馏水1000毫升
pH8.6,离子强度(M)0.05
6.其它:载物玻片,直径3毫米打孔器,20mmⅹ2mm玻璃铸型,微量进样器。
方法:
1.取载物玻片(7.5ⅹ2.5厘米)加上3.5毫升1.5%琼脂凝胶,制成2毫米厚的琼脂板。
2.按图位置,在琼脂板未凝固时,放入抗血清槽铸型,注意勿使铸型全部浸入琼脂中,待凝固时再打孔。
3.加待检标本:用微量进样器往孔中加1—5微升。
4.电泳:电压9—7伏/厘米,泳动15—20小时。
5.电泳后取出抗血清槽铸型,加入抗血清,进行双扩散,一般在24小时内沉淀弧出全。
6.观察结果:或描绘、拍照或进行染色,染色后的标本便于结果分析及保存。
(五)火箭电泳试验
火箭电泳实际是一种定量免疫电泳。其原理为:在电场作用下,抗原在含定量抗体的琼脂介质中泳动,二者比例在合适时在较短时间内形成状似火箭或锥形的沉淀线,而此沉淀线的高度常与抗原量成正比关系,因此本法可以测定样品中抗原的含量。
材料:
1.诊断血清(抗体):抗人IgG或IgA免疫血清
2.待检血清(抗原):人血清
3.参考血清
4.pH8.6,离子强度0.05M巴比妥缓冲液配制(见对流免疫电泳试验)
5.其它:琼脂粉,微量进样器,打孔器,玻璃板,电泳仪
方法:
1.抗体琼脂板的制备
同单向扩散法,但注意稀释液应用pH8.6离子强度0.05M的巴比妥缓冲液。
2.打孔见下图
3.将用缓冲液稀释的适宜浓度的参考血清及适当稀释的抗原(人血清)分别加入各孔中,每孔10或20微升,要求加量准确而不外溢。
4.把加完样的免疫琼脂板放入电泳槽中进行电泳,电压4—6伏/厘米,电泳时间1—5小时,直到大部分抗原孔前端出现顶端尖窄而完全闭合的火箭状沉淀线,关闭电源。
5.取下琼脂板,以抗原孔中心为起点,量出各火箭状沉淀线的高度。同单向琼脂扩散法绘制标准曲线,查出待检血清中Ig含量。


