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沉淀反应(Precipitation)实验
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-12-28

    可溶性抗原与相应的抗体混合,在电解质存在的条件下,两者比例适合,即可有沉淀物出现,叫沉淀反应(Precipitation).由于沉淀反应抗原多系胶体溶液。沉淀物主要是由抗体蛋白所组成。
    为了求得抗原与抗体的适宜比例,保证有足够的抗体,而且抗原分子小,具有较大的反应面积,因此操作上通常是稀释抗原,不稀释抗体。
    沉淀反应的种类有环状沉淀、絮状沉淀、荚膜膨胀、琼脂扩散及免疫电泳等。此外还有放射性同位素标记、酶标记等测定法。
    (一)环状沉淀反应
    当抗原与相应抗体形成一个接触面时,如二者比例适当,接触面上可形成一个乳白色的环状物即为阳性沉淀反应。
    材料:
    1.免疫血清:免疫兔抗人血清
    2.抗原:人血清
    3.小沉淀管、毛细吸管、橡皮头、生理盐水。
    方法:
    1.取小沉淀管2只,以毛细吸管吸取抗人血清约0.2毫升,加入第一管,加时注意不能有气泡。
    2.以毛细吸管吸取生理盐水0.2毫升加入第二管。
    3.用毛细吸管吸入血稀释0.2毫升加入各管,加时应注意使抗原溶液缓缓由管壁流下,轻浮于血清面上,使成一明显界面,切勿使之相混。
    4.置室温中10—20分钟,观察液面有无乳白色沉淀环,若有则为阳性。

    (二).琼脂扩散试验
    琼脂扩散是抗原抗体在凝胶中所呈现的一种沉淀反应。
    抗体在含有电解质的琼脂凝胶中相遇时,便出现可见的白色沉淀线。这种沉淀线是一组抗原抗体的特异性复合物。如果凝胶中有多种不同抗原抗体存在时,便依各自扩散速度的差异,在适当部位形成独立的沉淀线,因此广泛地用于抗原成分的分析。琼脂扩散试验可根据抗原抗体反应的方式和特性分为单向免疫扩散、双向免疫扩散、免疫电泳、对流免疫电泳、单向及双向火箭电泳试验。
    (1)单向琼脂扩散试验
    材料:
    1.诊断血清(抗体:抗人IgG或IgA免疫血清)
    2.待检血清(抗原):人血清
    3.参考血清:全国统一人血清免疫球蛋白参考血清(批号不同,免疫球蛋白含量不同)。
    4.其它:生理盐水、琼脂粉、微量进样器、打孔器、玻璃板、湿盒等。
    方法:
    1.将适当稀释(事先滴定)的诊断血清与予溶化的2%琼脂在60℃水浴预热数分钟后等量混合均匀制成免疫琼脂板。
    2.在免疫琼脂板上按一定距离(1.2—1.5厘米)打孔,见图1。
    3.向孔内滴加1:2,1:4,1:8,1:16,1:32稀释的参考血清及1:10稀释的待检血清,每孔10微升,此时加入的抗原液面应与琼脂板一平,不得外溢。
    4.已经加样的免疫琼脂板置湿盒中37℃温箱扩散24小时。
    5.测定各孔形成的沉淀环直径(mm),用参考血清各稀释度测定值绘出标准曲线,再由标准曲线查出被检血清中免疫球蛋白的含量。

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