实验试剂
  大肠杆菌DH5α
  LB培养基，
  0.1mol/LCaCl₂溶液（预冷）
  氨苄青霉素
  pUC18质粒

实验步骤

菌株活化:
1.用接种环直接取冻存的大肠杆菌DH5α，在LB培养基平板表面划线，于37℃培养16小时
2.挑取一个单菌落，转到3－5mlLB培养基中，于37℃培养3－5小时
3.将培养液全部转到100mlLB培养基中培养2－3小时，到OD₆₀₀＝0.3－0.4

感受态细胞制备:
4.将培养液转入1.5ml离心管中，在冰上放置15－30min
5.4000rpm离心5min,弃上清
6.加入0.8ml预冷的0.1mol/l CaCl₂,悬浮沉淀，冰上预冷10min
7.4000rpm离心5 min,弃上清
8.加入0.2ml预冷的0.1mol/l CaCl₂,悬浮沉淀，即可使用。也可加入总体积15％的甘油    可－70℃长期保存

外源DNA的转化:
9.取目的DNA加入大肠杆菌感受态细胞中，于冰上放置30min
10.于42℃水浴90S
11.冰上放置2min
12.加入800μlLB液体培养基于37培养1小时
13.将培养液均匀涂布在含Amp+的培养基平板上
14.将平板放置于37℃恒温培养箱中培养12-14个小时，然后观察结果

对照组
    对照组1: 以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液,其它操作与上面相同。此组正常情况下在含抗生素的LB平板上应没有菌落出现。 

  对照组2: 以同体积的无菌双蒸水代替DNA溶液,但涂板时只取5μl 菌液涂布于不含抗生素的LB平板上，此组正常情况下应产生大量菌落。  

转化率
统计每个培养皿中的菌落数。
　　转化后在含抗生素的平板上长出的菌落即为转化子，根据此皿中的菌落数可计算出转化子总数和转化频率，公式如下：
　　转化子总数＝菌落数×稀释倍数×转化反应原液总体积／涂板菌液体积
　　转化频率（转化子数／每mg质粒DNA）＝转化子总数／质粒DNA加入量(mg)
　　感受态细胞总数＝对照组２菌落数×稀释倍数×菌液总体积／涂板菌液体积
　　感受态细胞转化效率＝转化子总数／感受态细胞总数

实验结果

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