
•相对定量
–优点:可以不做标准品;标准品容易制备;
使用广泛
–缺点:数据理解困难
绝对定量:绝对标准曲线法
目标:测定目标基因的准确拷贝数
绝对定量误差的校正
•生物学方面的误差:IPC校正
细胞数量的差异、抽提效率、纯化损失、反转录效率等
•物理方面的误差:ROX校正
枪的误差(如试剂体积)、耗材质量(如管盖厚度、透光性能不一致)所导致的光能损失、仪器稳定性(如孔间、批间温度的波动)的误差等
•其余的误差:统计校正
重复实验,取平均值
绝对定量的数据处理
•管家基因校准(Normalization Gene)
相对定量有两种方法
定义:比较同一基因在不同样品中的表达量
结果:数据是%,没有单位
方法:相对标准曲线法和ΔΔCT法
应用:应用最广泛,功能最强大
相对定量:相对标准曲线法
标准品:可以只知道梯度稀释的稀释倍数
相对定量误差的校正
•生物学方面的误差:IPC校正
细胞数量的差异、抽提效率、纯化损失、反转录效率等
•物理方面的误差:ROX校正
枪的误差(如试剂体积)、耗材质量(如管盖厚度、透光性能不一致)所导致的光能损失、仪器稳定性(如孔间、批间温度的波动)的误差等


