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定量PCR实验数据处理
作者:陈云地 来源:appliedbiosystems 时间:2006-12-11



    •相对定量

    –优点:可以不做标准品;标准品容易制备;
    使用广泛

    –缺点:数据理解困难

    绝对定量:绝对标准曲线法
    目标:测定目标基因的准确拷贝数


    绝对定量误差的校正
    •生物学方面的误差:IPC校正
    细胞数量的差异、抽提效率、纯化损失、反转录效率等
    •物理方面的误差:ROX校正
    枪的误差(如试剂体积)、耗材质量(如管盖厚度、透光性能不一致)所导致的光能损失、仪器稳定性(如孔间、批间温度的波动)的误差等
    •其余的误差:统计校正
    重复实验,取平均值

    绝对定量的数据处理
    •管家基因校准(Normalization Gene)

    相对定量有两种方法
    定义:比较同一基因在不同样品中的表达量
    结果:数据是%,没有单位
    方法:相对标准曲线法和ΔΔCT
    应用:应用最广泛,功能最强大

    相对定量:相对标准曲线法
    标准品:可以只知道梯度稀释的稀释倍数

    相对定量误差的校正
    •生物学方面的误差:IPC校正
    细胞数量的差异、抽提效率、纯化损失、反转录效率等
    •物理方面的误差:ROX校正
    枪的误差(如试剂体积)、耗材质量(如管盖厚度、透光性能不一致)所导致的光能损失、仪器稳定性(如孔间、批间温度的波动)的误差等

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