管家基因—IPC

􀂋通常以uL或者ug为单位取样

􀂋细胞培养液：同样体积，细胞数目并不同样

􀂋DNA溶液：抽提效率和操作误差，同样体积的DNA并不来源于同样数目的细胞

􀂋copy/uL要校正成copy/cell才有意义



IPC的定义
••什么是什么是IPCIPCIPC通常选用管家基因它与目标基因在相同的PCR条件下具有相似的扩增效率
••IPCIPC的作用的作用监控PCR抑制物、DNA/RNA提取的损失、操作误差等对定量数据的影响，并对以上原因造成的定量误差进行修正。
IPC的选择标准
-在所有待测样品中，内对照(Endogenous Control)的表达量都恒定不变
-注意所选基因是否是组织依赖的、发育阶段依赖的、或者处理方式依赖的
-多重定量时，内对照的表达量最好比目标基因高
-推荐使用Human Endogenous Control Plate (P/N 4309920)测试不同管家基因的效果
-常用的内对照有18S rRNA、β-actin、GAPDH等

•在使用TaqMan MGB探针的情况下，你认为管家基因与目标基因是在同一管内做多重定量好，还是分成两管分别定量好？哪一种检测的数据更精确？

扩增效率要一致

曲线斜率< 0.1

校准荧光ROX

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