梯度稀释方法
选择目标、提取/PCR、纯化、测定浓度、调整浓度、梯度稀释
CT值在18-30之间，覆盖全部样品浓度区间
10倍连续梯度稀释方法：
1v原液(标准品i) +9v稀释缓冲液，得标准品ii
1v标准品ii+9v稀释缓冲液，得标准品iii
1v标准品iii +9v稀释缓冲液，得标准品iv
1v标准品iv +9v稀释缓冲液，得标准品v
切不可由标准品I分别加不同体积的稀释缓冲液直接得到标准品ii、iii、iv、v
标准品单位
标准品的性质决定最终结果的性质：
DNA标准品，已知拷贝数→绝对定量，得未知样品拷贝数
DNA标准品，已知ng/uL→绝对定量，得未知样品ng/uL
DNA标准品，未知拷贝数或浓度，已知稀释倍数→相对定量，得未知样品之间相差倍数
RNA标准品，已知ng/uL，与未知样品同样反转录，梯度稀释cDNA→相对定量，得未知样品ngRNA/uL
注意测定对单位的要求
如果要求测定样品的基因拷贝数，→梯度稀释已知摩尔浓度的DNA片段
如果要求测定样品的重量百分比[%(w/w)]，如转基因，标准品是将转基因与非转基因食品粉末按重量比混合，然后抽提混合DNA；切不可先抽好转基因DNA，再梯度稀释，也不可分别抽提转基因与非转基因DNA，再按重量比例混合（这样得出的是基因重量百分比，而不是样品重量百分比）
PCR效率对定量结果的影响
测定PCR效率
