1.定量PCR的实验要素
| 目标基因 | 未知样品 |
| 生成标准曲线 | 标准品梯度 |
| 监控系统故障 | 阳性对照 |
| 监控污染 | 阴性对照 |
| 校准生物学误差 | 管家基因(IPC) |
| 校准物理误差 | 参比荧光(ROX) |
| 降低其余误差 | 重复实验 |
96孔板设置举例
样品
标准品
目的：生成标准曲线，建立CT值与浓度之间的数学关系
不要求：
数学关系是抽象的，不要求标准品与目标基因使用相同的DNA
可以使用相同的DNA
也可以使用不同的：PCR产物、质粒、病毒、人工合成片段……
要求：
5点以上
浓度已知
PCR效率一致，且接近100%
•仪器一致
•反应条件一致：循环参数、同一次实验
•试剂质量一致：模板、引物和探针Tm值、酶及缓冲液
