[附]
（1）生长液：
①MEM 液63％，乳蛋白水解物20％
小牛血清 15％ 双抗(P、S)1％
用5．6％ NaHCO3 溶液调整pH 至7．2—7．4
②199 液 70％ 乳蛋白水解物 18％
小牛血清 10％ 双抗(P、S) 1％
用5．6％NaHCO3 溶液调pH 至7．2－7．4 。
③1640 液 88％ 小牛血清 10％
双抗(P、S) 1％ 用5．6％NaHCO3 溶液调pH 至7．2－7．4
（2）维持液
1640 液 96％ 小牛血清 2％
双抗(P、S) 1％ 用5．6％NaHCO3 溶液调pH 至7．2－7．4
2、人类白血病细胞(K562)的传代培养
试剂与仪器
●K562 细胞。
●RPMI l640 生长液。
●培养瓶、无菌吸液管(5m1 及1m1)、废液瓶等。
方法与步骤
（1）选生长良好的K562 细胞一瓶，轻轻加入等量的生长液。
（2）用无菌吸液管轻轻吹打，使K562 细胞均匀悬浮，然后吸出一半的细胞悬液加入另—个培养瓶中。
（3）37℃，5％C02 孵箱中培养24—48h。
（4）如果细胞比较浓，可按1：3 分配传代培养。
三、细胞的计数、分装与培养
1、细胞计数
细胞计数对于决定植入的细胞浓度和数量以及了解细胞存活率和增殖度都是极为重要的。
首先取待测的细胞悬液0．1ml 加D—Hanks 液0．8m1 及0．3％台盼蓝0．1mI(死细胞着色)，混合后滴入血球计数盘内，按白细胞计数法，于低倍镜下计数4 角的4 个大方格内的活细胞(透明未着色)总数，然后用下式计数：
在计数过程中，对大方格的边缘压线细胞应按数上不数下，数左不数石的原则进行计数。计数时，二次重复计算误差不应超过10％。
2、细胞的分装与培养
根据细胞计数，用生长液将细胞悬液稀释成(3—5)×105个／m1，每个培养皿内分装一定量。一般接种细胞数应视细胞种类不同而定，如类上皮细胞浓度应为(1－3)×105／m1，成纤维细胞应倍量[(2－6)×105／ml。若为胚胎组织细胞，细胞数量可低些，而成体组织细胞数量则应高些；细胞活力好的接种数可少些，年老组织接种的量就应多些。如对制各细胞的成活率把握不大，可先取少量分装试培养，次日抽样检查。如细胞成活，细胞贴壁，即可大量分装培养；如细胞不贴壁，则将制备的细胞弃掉需重新制备。一般通过细胞活性检测或视制备中的细胞性状等，对接种的成功率应心中有数，故实际中少量试装培养可省略。
37Y 孵箱静置培养，于2—3 天后换一次生长波，类上皮细胞约在5－7 天可长成单层细胞，成纤维细胞则以3－4 天或5－7 天为宜，以供使用。已铺满瓶皿底面的单层细胞，如继续培养则易老化，甚至脱落。感染病毒等影响特异性CPE 的判断，因此成片细胞不能当天使用，应换成维持液(不含或仅含2％以下血清的培基)，以后每隔5—7 天换维持液一次，一般可维持1—3 周，用这种维持细胞进行试验研究。
这种长成单层的原代细胞可进行传代培养用细胞分散剂(胰酶、EDTA 或胰酶／EDTA 等)处理，使细胞从培养皿上脱离，加生长液充分吹打，制成单个细胞悬液分装。加入生长液的量可按原量的2 倍，即一瓶传成二瓶，置37℃培养3－5 天可形成单层，成片后换维持液即可进行试验。
四、细胞的冻存、复苏与运输
