1、单层细胞培养法－原代鸡胚肌皮细胞培养方法
【材料】9-11日龄活鸡胚、Hanks液、营养液、0.25%胰酶溶液、无菌组织培养瓶、吸管、滴管、剪子、镊子等。
【方法】
（1）用碘酒消毒鸡卵气室端外壳，将鸡胚直立于卵架上，用无菌镊子取出鸡胚置无菌培养皿内，去头，爪、内脏和骨骼，用Hanks液洗两次。
（2）用小剪将鸡胚剪成小块（1～2mm3），加Hanks液洗涤，静置1～2分钟，用吸管吸去液体，依同法再洗涤2次，将血球充分洗去。
（3）用镊子将组织块放入无菌三角烧瓶内，加入0.25%胰酶溶液10～15ml，37℃水浴20分钟，中间摇动几次，由于胰酶的作用可使大量的细胞游离，液体变混。
（4）经四层纱布过滤后的细胞悬液，低速离心沉淀（1000转/分钟以内）5分钟，吸去上清液，再用Hanks液洗三次。
（5）沉淀物加入适量营养液，用白细胞计数的方法进行计数，使成每毫升含50～80万细胞的细胞悬液。
（6）每一组织培养瓶，注入细胞悬液1ml，盖好瓶塞，并将瓶略加摇动，使细胞均匀平铺于瓶壁，置37℃温箱孵育，一般4小时，细胞即已附着于瓶壁，48小时已长成单层。
【结果】培养48小时后长成单层，镜下可见瓶壁上有一层梭形活细胞，排列紧密，互相之间呈嵌合状，细胞外观透明，有一圆形核。此时即可弃去营养液，单层细胞用Hanks液洗2次（以除去营养液的血清中所含的病毒抑制物），接种病毒，并换用维持液。
2、细胞致病作用的观察
细胞致病作用也称“细胞病变作用” （Cytopathic-effect，CPE），根据病毒和感染细胞的不同，细胞病变作用大致可以分为三个类型。
（1）全变型：指整个细胞都发生改变，表现为①细胞核及整个细胞都发生肿胀，胞浆呈颗粒样变性、胞膜边缘不整齐；②或者整个细胞发生碎裂、皱缩、变圆、脱落。
（2）包涵体型：有的病毒可在胞核或胞浆内形成包涵体。
（3）融合型：有的病毒（如麻疹病毒、单纯庖疹病毒等）可使多数病变细胞间相互发生融合而呈“多核巨细胞”（但各个细胞的胞核仍可分辨）。
【材料】接种柯萨奇病毒后的Hep-2细胞培养病变管，Hep-2单层细胞培养对照管。
【方法】
病毒的细胞病变作用可直接在倒置显微镜下观察，由于细胞可受多种非特异性因素的影响而发生病变，所以观察时，一定要先观察对照组细胞，然后再观察实验细胞。
（1）未接种病毒的Hep-2单层细胞对照管，在低倍倒置显微镜下可见铺满管壁、排列规则紧密、互相嵌合的多边形细胞。
（2）接种柯萨奇病毒后的Hep-2细胞培养管，低倍镜下可见细胞团缩，变圆，堆聚及破坏脱落等细胞病变现象。
纵观整个单层细胞，以下列符号表示其病变程度：
“－” -- 无细胞病变；
“+” -- 25％以下的细胞有病变作用；
“++” -- 50％的细胞有病变作用；
“+++” -- 75％左右的细胞有病变作用；
“++++”-- 75％以上的细胞有病变作用；
三、病毒感染的免疫学诊断
以往实验室常用中和试验、补体结合试验、红细胞凝集抑制试验等血清学试验方法检测病毒抗体；近年来应用免疫荧光技术、酶联免疫吸附技术、间接红细胞凝集试验等检测病毒抗原或抗体，已成为实验室病毒感染诊断的常规技术。
ELISA是当前各实验室检测抗原抗体最常用的方法之一，也是进行病毒快速诊断的重要手段。
ELISA双抗体夹心法检测HBsAg
