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流感病毒的分离与鉴定
作者:未知 来源:宁夏医学院 时间:2006-11-13

    一、流感患者标本的采取与处理

    【材料】无菌漱口液(1:1普通肉汤与生理盐水)15ml、双抗溶液(每毫升含青霉素2万单位、链霉素2万微克)。

    【方法】
    1、发病不超过三日的典型患者,闭口轻咳数次,无菌漱口液15ml反复含漱咽喉部后吐入原试管,试管放入冰壶内立即送检或将咽漱液-200C冷冻保存。
    2、将咽漱液充分振摇、40C冰箱静置10分钟,取上清液1.8ml,加入含双抗液0.2ml的小瓶里摇匀,置4℃下作用1-2小时后接种鸡胚。


    二、流感病毒的培养
    【材料】
    9-11日龄鸡胚、10-3稀释的流感病毒液、蛋座、锥子、检卵灯、1ml注射器、碘酒和酒精棉球、胶布。
    【方法】
    1、鸡胚接种:用灭菌1ml注射器吸取流感病毒液0.2ml接种于9-11日龄鸡胚尿囊腔中(方法见实验十三,P.93),胶布封孔后,记上姓名、日期,放35℃温箱孵育,每日检卵一次,观察血管影象是否清晰。培养72小时后取出,4℃冰箱过夜,次日收获尿囊液。
    2、收获尿囊液:收获的尿囊液进行初步鉴定或置-70℃冻存。
    三、流感病毒的初步鉴定
    首先对收获的尿囊液进行血凝试验,检测有无病毒。如果血凝试验阴性,则盲传三代,仍为阴性,便可以否定病毒的存在。
    (一)血凝试验
    某些病毒(如流感病毒、副流感病毒、腮腺炎病毒、脑炎病毒等)能选择性地凝集多种哺乳类动物和鸟类的红细胞,出现红细胞凝集现象,简称血凝现象。这是由于流感病毒表面的血凝素是糖蛋白成分,红细胞表面有糖蛋白的受体,流感病毒血凝素结合在红细胞表面的糖蛋白受体上,从而发生红细胞凝集。
    【材料】流感病毒尿囊液、0.5%鸡红细胞悬液、生理盐水、血凝板、1ml吸管等。
    【方法】
    1、取血凝板一块,1-9孔为试验孔,第10孔为对照。
    2、按照下表依次加入相应材料。
    3、加完后摇匀,置室温60分钟,观察并记录结果(勿摇动血凝板)。
    表14-2  流感病毒血凝试验操作表

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