五、细菌的生长情况观察
细菌的种类不同，其生长情况也有差别，因而观察细菌的生长情况，对于研究鉴别细菌很重要。下面介绍几种细菌生长情况的观察方法。
（一）细菌在固体琼脂平板上生长情况的观察
【材料】
1、普通琼脂平板分别接种金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、枯草杆菌、变形杆菌。
2、血琼脂平板分别接种金黄色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌。
【方法】
选择细菌分散生长，形成单个菌落区域中的菌落进行观察。菌落为鉴定细菌的重要指标之一，观察项目主要有以下几点。
（1）大小：菌落直径通常以实测mm数表示，也可按习惯描述为针尖大、粟粒大等。
大菌落：直径4～6mm或大于6mm； 中等菌落：直径2～4mm
小菌落：直径1～2mm； 细小菌落：直径小于1mm；
（2）形状：圆形、卵圆形、叶状、不规则形、放射状等。
（3）颜色：无色、白色、黄色、绿色、褐色等。色素有脂溶性和水溶性两种，脂溶性仅菌落有颜色，培养基不着色；水溶性则菌落和培养基均着色。如色素不明显，可用滤纸条轻轻沾菌落表面，如有色素产生，可使滤纸染成相应颜色（沾有细菌的滤纸条观察后投入消毒缸里）。
有的鉴别和选择培养基，在细菌生长过程中形成一定颜色，如大肠杆菌在中国蓝培养基上形成蓝色菌落，而在S-S琼脂培养基上形成红色菌落，这是由于大肠杆菌发酵乳糖产酸，借指示剂而显色，与细菌本身产生色素不同。
（4）表面：凸起、扁平、中心凹陷等；光滑、粗糙、皱纹、颗粒状等；湿润（有光泽）、干燥（无光泽）等；
（5）边缘：整齐、不整齐（可有颗粒样，羽毛样、锯齿状、毛发状等）；
（6）透明度：透明、半透明、不透明等；
（7）溶血性：指细菌于血琼脂培养基上对其周围血液的溶解情况，可分为完全溶血（β型溶血），不完全溶血（α型溶血）和不溶血。
（8）迁徙生长现象
根据以上观察特点，可将菌落分为三个类型：
1、光滑型菌落（Smooth type Colony）：又称S型菌落，此种菌落特点为表面光滑、湿润、边缘整齐、至于其它特点如凸起或扁平、色素、透明度、溶血等可因菌种而异。
2、粗糙型菌落（Rough type Colony）：又称R型菌落，此种菌落表面粗糙、干燥、边缘不整齐。
3、粘液型菌落（Mucoid type Colony）：又称M型菌落，此型菌落表面光滑、湿润、呈粘液状，以接种环触之可拉出丝状物，“成丝试验”阳性可作为鉴别，如肺炎杆菌。
固体平板上，菌量多的部分，菌落常融合成片，形成菌苔，菌苔一般不做为鉴定的指标。
（二）细菌在固体斜面上生长情况的观察
【材料】琼脂斜面培养基、柠檬色葡萄球菌。
【方法】
观察固体斜面上菌苔的生长情况。也有的在斜面培养基内加指示剂或特定底物，做为鉴别培养基，供鉴别细菌用。
（三）细菌在液体培养基中生长情况的观察
【材料】肉汤培养基、枯草杆菌、大肠杆菌或葡萄球菌、链球菌；
【方法】
肉汤在未接种细菌前是澄清的，接种细菌后可有以下三种生长现象：
1、混浊生长：液体变混浊。
2、沉淀生长：上层培养液澄清，管底有絮状或颗粒状沉淀物。
3、形成菌膜：培养液澄清，表面形成一层菌膜。
（四）细菌在半固体培养基中生长情况观察
【材料】半固体培养基、大肠杆菌、葡萄球菌。
【方法】
在半固体培养基中，无鞭毛细菌沿接种线生长，接种线清晰，培养基澄清；有鞭毛细菌弥散生长，接种线模糊不清，周围培养基变混浊；借此可以判断细菌有无动力。
【附录】恒温孵育箱
一般致病性细菌生长所需的适宜温度是35℃±2℃，适宜湿度是40～80％。工作中通常应用恒温孵育箱提供此条件。
孵育箱是一个两层壁的长方形箱，壁间充空气或水，外层壁衬有热不良导体，如石棉、木屑等物质。箱顶装温度计一支，指示箱内温度。箱门常为两层，外为铁门，内为玻璃门，箱内放有金属板数层，便于放置培养物。
孵育箱多借电热法加温，并借助调节器自动调节并保持所需温度。
使用隔水式孵育箱时，需在夹层中灌水，应以37℃左右的温水加至箱高4／5处，再直接通电源，待调节器调准所需温度后，观察一段时间，直至温度恒定为止。
取培养物时，动作要敏捷，用毕即关好箱门，以免温度发生波动，影响微生物的生长。为防止干燥，可在孵育箱中放一盛水容器，使保持一定的湿度。
