【方法】
（1）固体斜面培养基接种法：
①左手握持菌种管与待种培养管的下端，使斜面部向上，两管口平齐。在火焰旁，以右手手掌与小指、小指与无名指分别拔取并夹持两管棉塞，并将两管管口迅速通过火焰灭菌。
②右手执接种环（姿势与握铅笔相似）火焰烧灼灭菌，欲伸入试管内的接种杆部分，亦要通过火焰3次以杀灭其表面的杂菌。灭菌过的接种环要握持手中，勿再碰及其它物品。
③将灭菌并已冷却的接种环伸入菌种管，从斜面上挑取菌苔少许，退出菌种管，再伸进待种管中，自斜面底部轻轻向顶端划一直线，然后自下而上沿斜面蜿蜒划线，注意划线时勿划破培养基表面，沾菌的接种环，进出试管时，均不应触及试管内壁。（如图2-2）。
④接种完毕，两管管口迅速通过火焰2～3次，塞回棉塞，并以右手拇指、食指分别将两管棉塞转进至原来位置。接种环灭菌后送回。接种管注字后37℃孵育18～24小时后观察生长情况。
图2-2 斜面接种法示意图
图2-3 液体培养基接种法 （2）液体培养基接种法：
基本上同固体斜面接种法，不同处，仅在取菌后，接种环应在液体培养基管接近液面的管壁处轻轻研磨均匀（如图2-3），然后将试管稍倾斜，使菌种混匀于肉汤中即可。
（3）半固体培养基接种法：
①同上法握好菌种管及半固体培养基管。
②右手握持接种针，灭菌冷却后，以针挑取菌苔，垂直刺入半固体琼脂培养基的中心，可刺达近管底处，但不触及管底，然后循原路退出。
③接种毕，管口通过火焰灭菌，塞上棉塞，接种针灭菌后放回（如图2-4）。
上述纯种细菌接种后，均要在试管上注明菌名、接种者姓名、日期，送入37℃温箱，培养18～24小时后观察生长情况。
（二）细菌的培养法： 根据待检细菌的生物学特性和培养目的，可选择采用一般培养法、二氧化碳培养法及厌氧培养法。
1、一般培养法：
又称需氧培养法。将已接种好的平板、斜面、液体培养基置于37℃恒温孵育箱中，经18～24小时培养后，一般可于培养基上长成肉眼可见的培养物。如菌量很少或生长缓慢的细菌则需培养3～7天甚至1个月才可见培养物生长。
2、二氧化碳培养法：
某些细菌如脑膜炎球菌，淋球菌及肺炎链球菌等培养于含有5～10％二氧化碳环境下才能迅速生长，尤其是自标本中初次分离时更为重要。为使培养环境中含5～10％二氧化碳，常用方法有下列二种：
（1）烛缸法：此为一手续简便而效果良好的方法。
A、取一具有严密瓶盖的玻璃干燥器，将已接种细菌的试验管或培养皿等置于此玻璃器内。
B、取普通蜡烛一短段，将其点燃，并将蜡烛粘附于器内。
C、随即将器盖加凡士林油严密盖紧，切勿漏气，此时蜡烛火焰之上端与盖底必须保持适当距离（一般离开约10cm即可），以免火焰烧灼盖底引起炸裂。
D、容器内的蜡烛一般于30～60秒间即熄灭，此时容器内的二氧化碳约占10％左右。
E、将玻璃干燥器置于37℃温箱内培养。
（2）硫酸与碳酸钠法
A、将已接种细菌的试管或培养皿置于一有密闭盖的容器内。
B、取原盛青霉素的空瓶或其它玻瓶一个置于此容器内。
C、估计此容器内部容积，将适量碳酸钠粉末加于此小瓶内，然后再加入适量10％硫酸溶液，使与碳酸钠粉末混合，例如容器容积为l000ml，则加入无水碳酸钠0.24g与10％硫酸溶液4ml，即产生所需的二氧化碳。
D、待反应发生后，将盖严密盖紧。
E、将此容器置于37℃温箱内培养。
3、厌氧培养法
