7.需要设备及试剂（试剂盒中未提供）
设备：
1） 均质器
2） 振荡器
3） 微孔酶标仪（450nm）
4） 离心机
5） 20ul，50ul，100ul，200ul微量加样器
6） 免疫亲和柱（每根柱子可以至少可以纯化120-150个样本，也可以用C18柱纯化）。
试剂：
1） 氢氧化钠
2） 0.01M HCL
3） 5M盐酸
4） 蒸馏水
8.工作液的准备：
1） 洗液：用蒸馏水按（1+9）稀释
2） 样品稀释液：将样品稀释液用蒸馏水按（1+19）稀释（注：在使用前再配）。
3） 底物溶液：用柠檬酸缓冲液（1+9）稀释（注：柠檬酸缓冲液本试剂盒内有提供，稀释后的溶液避免光线直射）。
注：终止液含硫酸，要小心操作。
9.样品前处理：
9.1尿液和血清：（稀释因子1）
尿液和血清不用处理，直接测定。（如果尿液浑浊，一定要过滤或离心）
9.2肝脏
9.2.1（简便前处理方法）（稀释因子3）
1） 取1g肝脏样品，加入2ml0.01M HCL.
2） 均质5分钟.
3） 检查pH值是否在6.5-8之间，否则用氢氧化钠或盐酸调节.
4） 离心15分钟3500rpm，或者离心5分钟13000rpm，转移出上清液备用.
9.2.2.（复杂前处理方法）（稀释因子1）
1） 带有低脂肪的肝，肉或组织.
2） 5g粉碎的样品于25ml 50mM 盐酸混合，振荡15分钟，以达到均质的目的。
3） 称6g均质物（相当于1g肝脏），加入离心瓶中。
4） 10—15℃离心15分钟4000rpm或更高的转速。
5） 转移出上清液至另一个离心瓶中，加300ul 1M 氢氧化钠混合15分钟。
6） 加入4ml 500mM 磷酸二氢钾缓冲液pH3.0，简单混合并在4℃保存至少1.5小时或过夜
7） 在10-15℃离心15分钟，4000g或更高转速。
8） 分离全部上清液（应该是清亮的），使其升至室温（20-24℃），然后用C18柱纯化（见C18柱纯化步骤）。
C18柱纯化方法：
所有试剂和样品处理必须在室温下（20-24℃）并严格控制过柱时的流速。（非常关键）
1） 用3ml100%甲醇洗涤柱子，流速为1滴/秒。
2） 用2ml洗涤液洗涤柱子（50mM磷酸二氢钾缓冲液pH3.0）。
3） 样品进柱。
4） 用2ml洗涤液洗涤柱子（50mM磷酸二氢钾缓冲液pH3.0）。
5） 用正压去除残留的液体并用空气或氮气吹2分钟干燥柱子。
6） 用1ml100%甲醇洗脱样品，流速为15滴/分钟。
7） 在50-60℃弱空气或氮气流下完全蒸发溶剂。
8） 用1ml蒸馏水溶解干燥的残留物，备用分析。
