2.5.3.洗板
2.5.3.1 各个厂家使用的洗液配方是不同的，是根据各自试剂的条件配制的，采用不配套的洗液常会得到不正常的反应结果，包括本底过高。本公司的洗液采用独特的洗涤系统不能和其它公司的试剂盒混用。
2.5.3.2 试剂盒中提供的洗液是浓缩的，应该稀释到规定的倍数使用，过多稀释洗液，会影响洗液的效果，而使反应的本底过高。
2.5.3.3 稀释洗液的水应该是新鲜的蒸馏水，电导率小于1.2μs。如果水中含有过多的Ca2+、Mg2+，这些离子会占用表面活性剂，影响洗涤效果。
2.5.3.4 洗板时，应每孔加满洗液，如果加入的洗液液量不够，对洗涤的效果影响也是很大的。本公司的酶联板板孔为400μl，比别的厂家的板孔大，因此洗了别公司的板后要及时调整液量，以避免加液量不满。
2.5.3.5 洗板的次数不够孔内多余的抗原（抗体）或酶结合物不能彻底去除，也会因此本底升高。
2.5.3.6 洗板的强度和洗板的浸泡时间是密切相关的。洗板机不同，使用的泵不同，液体加入时的冲力不同。如果加入洗液的冲力不大，也没有设定浸泡时间，同样会使结果的A 值偏高。
2.5.3.7 洗板完毕后，要进行拍板，尽量采用质量好的毛巾和吸水纸，使用易掉渣的纸，纸屑会留在板孔中，由于纸屑中含有氧化剂而造成高值阴性。
2.5.4 显色。加A、B 液准确，顺序不能颠倒，要及时终止显色。终止后要在3 分钟内读数，否则强阳性会变低。
2.5.5.枪头、加样槽或其它来源的污染
如果使用的枪头、加样槽是反复使用的，必须肯定其没有来自酶或阳性的污染。酶作为反应的催化剂，及其微量也会很明显影响反应。反复使用的枪头、加样槽清洗不当，也会干扰反应。如将枪头使用84 消毒液浸泡而没有冲洗干净，因为84 是强氧化剂，加入AB 液后就会显色。同样枪头和加样槽不正确清洗，改变加入试剂的PH 值，反应的结果也会不正常。常常有人用手纸将加样槽擦干，但是如果使用的手纸容易掉渣，会将纸上的强氧化剂留在槽中而影响反应。
2.5.6.测A 值时，微孔条底部不透明、带水滴、有划痕及不规则的表面都可能引起A 值的升高。
三、cut off 值附近血清的处理
1.cut off 值附近的值是客观存在的
cutoff 值指经过大量临床调查后自行制定的判断阴阳性的界限。Cut off 值附近的值客观存在基于以下原因：大量临床阴性样本A 值呈正态分布；这些阴性样本A 值是由低到高的连续曲线；cutoff 值是这个连续曲线上的截断值。
1.1 正常血清A 值的正态分布如图一：
当试剂盒研发完成后，需要进行大量的临床样品的考核。其中阴性血清的A 值呈正态分布，大约95％的阴性血清值与平均值相近，而有5％的阴性血清则明显低于或高于平均值，这是cutoff 值可根据95％的置信限来确定。若试剂盒的特异性很好，可用98％作为置信限来确定cutoff 值。但不论是选择多少的置信限，总存在置信限以外的区域，该区域的部分样品A 值会高于cutoff 值，从统计上说是无法避免的。
1.2 正常血清A 值的连续分布
经过大量的临床调查会发现，正常血清的A 值是一条从小到大的连续曲线。如图二：
在这条连续的曲线上，经过计算选取一点作为cutoff 值，这一点之下为阴性，之上为阳性，因此cutoff 值附近的值是必然存在的。
2.怎样对待cutoff 值附近的血清
2.1 本公司试剂盒有很好的敏感度和特异性，不提倡设置灰区，坚持按照说明书要求，大于等于cutoff 的为阳性。
2.2 某些检验单位有划灰区的习惯，灰区一般是在相应的cutoff 以下8％－10％范围内，国家并没有一定的规定，对于一定要设置灰区的单位，本公司建议在我们的cutoff 值以下10％为灰区。值得注意的是本公司的HCVcutoff 是变化的，所以灰区也应是变化的。
2.3 对于可疑样本可采用多次数检验的方法作为阴阳性判断的依据。如进行5 此重复性试验，有3 次为阳性，2 次为阴性，判断样本为阳性。
