3、充液：将盖玻片先盖在计数板上，用洁净的吸血管吸取摇匀的稀释血液，然后将吸管口轻轻斜置盖玻片的边缘，滴出少量稀释血液，使溶液借毛细管现象而流入计数室内。但必须注意，如滴入过多时，流出室外凹沟中，易造成盖玻片浮起，体积不准；过少时，经多次充液，易造成气泡，所以都应洗去重新充液。
4、计数：稀释血液滴入计数室后，须静置2—3分钟，然后低倍镜下计数（显微镜焦距准确，缩小光圈并降低聚光器。使视野较暗）。计数白细胞时，数四角四个大方格内的白细胞总数。计数红细胞时数中央大方格四角的四个中方格和中央的一个中方格（共5个中方格）内的红细胞总数，计数时应循一定的路径以免遗漏或重复。对于分布在划线上的血细胞，依照“数上不数下， 数左不数右”的原则进行计数（图1-5-3）。
计数白细胞时，如发现每个大方格白细胞数相差10个以上；计数红细胞时，如发现各个中格之间的红细胞数相差超过15个，表示血细胞分布不均匀。应将计数板洗净，重新摇匀稀释血液，再充液计数。
5．计算
红细胞数目：将5个中方格内数得的红细胞总数乘以10，000．即得每立方mm血液中红细胞总数。
计算公式为：红细胞数/mm3 = 5个中格红细胞数×稀释
倍数/计数的5个中格容积
（1）稀释倍数等于稀释液2ml除以加入血10μL（0.01ml），为200倍。
（2）计数室5 个中格容积为0.2×0.2×0.1×5 = 0.02 mm3。
白细胞数目：将4个大方格内数得白细胞总数乘以50，即每立方mm血液的白细胞总数。
计算公式为：白细胞数/ mm3 = 4个大方格白细胞数×稀释倍数/ 计数的4 个大格容积
（1）稀释倍数等于稀释液0.38ml+血20μL（0.02ml）/0.02ml，为20倍。
（2）计数室4个大方格容积为1×1×0.1×4= 0.4 mm3
[方法评估]
采用显微镜目视计数法为血液红、白细胞数量测定的最常用的基本方法，目前虽有各种自动化分析方法，但该方法由于经典、方便、实用，仍较广泛用于血液检验和科研实践中。
[应用意义]
红细胞是血液中数量最多的有形成分，在正常情况下几乎占血容量的1/2，故使血液呈红色粘稠混悬液。红细胞数量正常情况下保持相对稳定的。多数鱼100—300万个/mm 3，高者可达400万个/mm3 低者数万/ mm3。
鱼类红细胞数也因性别不同而有差异，一般雄鱼的红细胞数比雌鱼多。此外鱼类红细胞数量常因鱼种、年龄、外界环境变化、机体不同生理状况（运动状况、患病、营养状况等）而出现一定的差异。环境变化如长期缺氧红细胞代偿性增多。
鱼类白细胞数量随种类、年龄、生理状况（产卵）、疾病以及一些外界环境因素影响而变化，此外，鱼类白细胞还与饲养条件、营养状况有关：饱食消化力旺盛时多，长期饥饿白细胞（特别是嗜酸性白细胞）显著减少。
[注意事项]
1、各种用具要事前清洗。清洗吸管时按照蒸馏水（两次）→ 95%酒精（两次）→ 乙醚（两次）的方法清洗。计数室用蒸馏水洗后，再用软纱布或擦镜纸吸干。
2、采血要求迅速、准确，不能凝血，也不能有气泡，否则弃去重采。
3、血吸管用完后必须立即清洗干净，以防血液凝固堵塞管口。
血细胞稀释液
1、白细胞稀释液
冰醋酸（破坏红细胞） 1.5毫升
1%龙胆紫（染白细胞核便于计数） 1毫升
蒸馏水 加至100毫升
2、红细胞稀释液
NaCl (维持渗透压) 0.5克
Na2SO4 (使溶液比重增加，红细胞分布不易下沉) 2.5克
HgCl （固定红细胞形状） 0.25克
蒸馏水 加至100毫升
