四、操作步骤:
　　1. 切取组织5g左右,剔除结缔组织,吸水纸吸干血液,剪碎放入研钵(越细越好)。 
　　2. 倒入液氮,磨成粉末,加10ml分离缓冲液。 
　　3. 加1ml 10% SDS, 混匀,此时样品变得很粘稠。 
　　4. 加50ul或1mg 蛋白酶 K, 37℃保温1-2小时, 直到组织完全解体。 
　　5. 加1ml 5mol/L NaCl, 混匀,5000rpm离心数秒钟。 
　　6.取上清液于新离心管，用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提。待分层后,3000rpm离心 5分钟。
　　7. 取上层水相至干净离心管, 加2倍体积乙醚抽提(在通风情况下操作)。 
　　8. 移去上层乙醚,保留下层水相。 
　　9. 加1/10 体积3mol/L NaAc, 及2倍体积无水乙醇颠倒混合沉淀DNA。室温下静止10-20分钟，DNA沉淀形成白色絮状物。 
　　10. 用玻棒钩出DNA沉淀,70%乙醇中漂洗后,在吸水纸上吸干,溶解于1ml TE中,-20℃保存。 
　　11. 如果DNA溶液中有不溶解颗粒,可在5000rpm短暂离心,取上清; 如要除去其中的RNA,可加5μl RNaseA(10μg/μl), 37℃保温30分钟, 用酚抽提后, 按步骤9-10重沉淀DNA。 
细菌基因组DNA的制备
　　一、材料 
　　细菌培养物。 
　　二、设备 
　　移液管, 高速冷冻离心机, 台式离心机，水浴锅。 
　　三、试剂 
　　1、CTAB/NaCl溶液：4.1g NaCl溶解于80ml H₂O,缓慢加入10g CTAB,加水至100ml。 
　　2、其它试剂：氯仿:异戊醇(24:1)，酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)，异丙醇，70% 乙醇，TE，10% SDS，蛋白酶 K (20mg/ml或粉剂)，5mol/L NaCl。 
　　四、操作步骤：
　　1. 100ml 细菌过夜培养液, 5000rpm离心10分钟, 去上清液。 
　　2. 加9.5ml TE悬浮沉淀, 并加0.5ml 10% SDS, 50μl 20mg/ml(或1mg干粉)蛋白酶 K, 混匀, 37℃保温1小时。 
　　3. 加1.5ml 5mol/L NaCl, 混匀。 
　　4. 加1.5ml CTAB/NaCl溶液, 混匀, 65℃保温20分钟。 
　　5. 用等体积酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提, 5000rpm离心10分钟, 将上清液移至干净离心管。 
　　6. 用等体积氯仿:异戊醇(24:1)抽提, 取上清液移至干净管中。 
　　7. 加1倍体积异丙醇, 颠倒混合, 室温下静止10分钟，沉淀DNA。 
　　8. 用玻棒捞出DNA沉淀, 70%乙醇漂洗后, 吸干,溶解于1ml TE, -20℃保存。如DNA沉淀无法捞出,可5000rpm离心, 使DNA沉淀。 
　　9. 如要除去其中的RNA, 可以按本章第三节中操作步骤处理。 

基因组DNA的检测
　　上述方法得到的DNA一般可以用作Southern, RFLP、PCR等分析。由于所用材料的不同,得到的DNA产量及质量均不同,有时DNA中含有酚类和多糖类物质,会影响酶切和PCR的效果。所以获得基因组DNA后,均需检测DNA的产量和质量。
　　1. DNA溶液稀释20-30倍后,测定OD₂₆₀ /OD₂₈₀ 比值, 明确DNA的含量和质量。 
　　2. 取2-5μl 在0.7% agarose胶上电泳, 检测DNA的分子大小。 
　　3. 取2μg DNA, 用10单位(U)HindⅢ酶切过夜, 0.7% agarose胶上电泳, 检测能否完全酶解(做RFLP, DNA必须完全酶解)。 
　　如果DNA中所含杂质多, 不能完全酶切, 或小分子DNA多, 影响接续的分析和操作,可以用下列方法处理： 
　　（1）选用幼嫩植物组织，可减少淀粉类的含量。 
　　（2） 酚:氯仿抽提, 去除蛋白质和多糖。 
　　（3）Sepharose柱过滤, 去除酚类、多糖和小分子DNA。 
　　（4）CsCl梯度离心, 去除杂质, 分离大片段DNA(可用作文库构建)。

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