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单克隆抗体的制备及应用
作者:廖伟娇 来源:广州医学院第一附属医院检验科 时间:2006-11-9


    一、单克隆抗体概念:


    每一克隆B细胞所产生的理化性状高度均一、
    组成均一、
    只与同一种抗原决定族反应的抗体,
    称为单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)。


    二、杂交瘤技术制备单克隆抗体流程



    三、单克隆抗体的基本技术
    1.抗原提纯与动物免疫:
    抗原纯度高:电泳纯
    与骨髓瘤细胞同源的BALB/c小鼠
    2.细胞的选择:
       A 经过抗原免疫的B细胞(脾细胞)。
       B 肿瘤细胞(多发性骨髓瘤细胞:Sp2/0)。
    3.细胞融合:
       融合剂:聚乙二醇
         (PEG,常用聚合度1000~2000浓度w/v:40%)
       细胞比例:   1:2~1:10,常用1:4。
       反应时间:2~4min。
    4.培养基的选择:HAT培养基。含有三种关键成分:次黄嘌呤(hypoxanthine,H)氨甲蝶呤(aminopterin,A)和胸腺嘧啶核苷(thymidine,T).
    5.细胞的DNA合成一般有两条途径:
    A:由糖和氨基酸合成核苷酸,进而合成DNA,叶酸作为重要的辅酶参与反应。
    B:在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在下,经次黄嘌呤磷酸核糖转化酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶(TK)的催化下合成DNA。

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