一、单克隆抗体概念:
每一克隆B细胞所产生的理化性状高度均一、
组成均一、
只与同一种抗原决定族反应的抗体,
称为单克隆抗体(monoclonal antibody,McAb)。
二、杂交瘤技术制备单克隆抗体流程
三、单克隆抗体的基本技术
1.抗原提纯与动物免疫:
抗原纯度高:电泳纯
与骨髓瘤细胞同源的BALB/c小鼠
2.细胞的选择:
A 经过抗原免疫的B细胞(脾细胞)。
B 肿瘤细胞(多发性骨髓瘤细胞:Sp2/0)。
3.细胞融合:
融合剂:聚乙二醇
(PEG,常用聚合度1000~2000浓度w/v:40%)
细胞比例: 1:2~1:10,常用1:4。
反应时间:2~4min。
4.培养基的选择:HAT培养基。含有三种关键成分:次黄嘌呤(hypoxanthine,H)氨甲蝶呤(aminopterin,A)和胸腺嘧啶核苷(thymidine,T).
5.细胞的DNA合成一般有两条途径:
A:由糖和氨基酸合成核苷酸,进而合成DNA,叶酸作为重要的辅酶参与反应。
B:在次黄嘌呤和胸腺嘧啶核苷存在下,经次黄嘌呤磷酸核糖转化酶(HGPRT)和胸腺嘧啶核苷激酶(TK)的催化下合成DNA。


