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PCR基因扩增
作者:未知 来源:生物秀 时间:2006-11-9

    一、原理
    多聚酶链式反应(polymerase chain reaction , PCR)类似于DNA 的天然复制过程:经过变性、退火、延伸多次循环(图1 ) , DNA 扩增倍数可达2 n 倍。即
    Y = ( 1 + X ) n
    式中,Y 为DNA 扩增倍数;X 为扩增效率;n 为循环次数
    二、材料
    (1)模板DNA;PCR 引物;Taq DNA 聚合酶;dNTP ; PCR 缓冲液[20 mmol / L Tris -Hcl 缓冲液(pH 5.3 ) , 1.5 mmol / L MgCl2 , 25 mmol / L Kcl , 100 μg / mL 灭菌明胶或无核酸酶的牛血清白蛋白,0.05 % Tween 20 〕;石蜡油。
    (2)乙肝病毒基因的PCR 检测试剂盒。
    (3) PCR 扩增仪。

    图1 PCR 基本原理示意图
    三、方案
    1 、经典的PCR 扩增方案
    经典的PCR 扩增方案为:
    反应总体积              100μL
    模板DNA                105 -106 个分子
    PCR 引物                 20 pmol / L
    Taq DNA 聚合酶   2U
    dNTP                       50 μmol / L
    PCR 缓冲液
    20 mmol /L              Tris-HCI 缓冲液(pH8.3 )
    1.5 mmol /L              MgC12
    25 mmol /L                KCl
    100μL                       灭菌明胶或无核酸酶的牛血清白蛋白
    等体积石腊油覆盖。
    2、乙肝病毒基因的PCR 检测
    1 ) 标本处理

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