13．将适当体积（每个90mm平板可达200μl）已转化的感受态细胞转移到含200mmol/l MgSO4和相应抗生素的SOB培养基上。
14．将平板置于室温至液体被吸收。
15．倒置平皿，于37℃培养，12～16h后可出现菌落。
三、用M13噬菌体转染感受态细胞
1．感受态细胞的制备
（1）用JM101或TG1等菌的培养菌液在M9基本培养基平板上的划线培养，于37℃温育24～36h。
（2）批量制备冻存的感受态细胞的方法，同大肠杆菌感受态细胞的制备。
2.用M13噬菌体转染感受态细胞
（1）用2×YT或SOB培养液于37℃持续地振摇，将用于铺平板的细胞（JM101或TG1等）培养过夜。
（2）从-70℃以下冰箱中取出一份冻存的JM101或TGI感受态细菌，于室温慢慢融化，立即放在冰上10min。
（3）于各感受态细胞管中，加入连接反应液，应同时做两个对照，一个加5pgM13噬菌体双链环状DNA，另一个则完全没有DNA。轻弹管外壁使其混匀，冰浴30min。
（4）取数支无菌培养管，分别加入3ml熔化的2×YT或SOB顶层琼脂，置47℃以备步骤6使用。
（5）将装有感受态细胞和DNA的培养管放入42℃水浴，温育整整90s，立即将管放回冰浴之中，2min后各管加入1ml过夜培养的JM101或TG1等菌液，混匀。
（6）在步骤（4）准备的装有溶化的2×YT或SOB顶层琼脂的管内各加入40μlX-gal溶液（20mg/ml，溶于二甲基甲酰胺）和4μlIPTG溶液（200mg/ml）振荡混匀，分别取（5）中混合物各300μl加入各管，振荡混匀，立即将管内混合物倾入标记好的LB琼脂平板上，轻轻旋动平皿，以使细菌与顶层琼脂分布均匀。
（7）盖好平皿，于室温放置5min，使顶层琼脂凝固，将平板倒置于37℃培养。4个h后噬斑开始出现，8～12h后菌斑不再变化。野生型M13噬菌体形成的噬斑为深蓝色，重组噬菌体则可形成无色噬斑。
四、含重组质粒的细胞菌落的鉴定
含重组质粒的细胞菌落常用的鉴定方法有：①小规模制备质粒DNA进行限制酶切分析；②α互补；③插入失活；④杂交筛选。下面简要介绍小规模制备质粒DNA进行限制性酶切分析。小规模制备质粒DNA可用天美等公司的Wizard Minipreps DNA试剂盒或采用下述方法：
1.挑取一些独立的转化菌落进行小规模培养，用无菌牙签或挑种环挑取单菌落于2ml含有相应抗生素的LB液体培养基中，于37℃剧烈振摇下培养过夜。
2．将1.5ml培养物倒入微量离心管中，用微量离心机于4℃以12000g离心30s，将剩余的培养物贮存于4℃。
