三、pCR-SSCp的实验操作
在小于1Kb长度的情况下，DNA片段长度与丙烯酰胺的浓度选择如下:
| DNA片段长度(核苷酸数) | (%) |
| 1Kb～700b | 3.5 |
| 700b～500b | 5 |
| 500b～200b | 8 |
| 200b | 12 |
在进行SSCp前首先要通过pCR扩增出特异性好的产物(琼脂糖电泳不能有过强的拖尾).
1)制备聚丙烯酰胺凝胶(pAG)
按上表制所需的胶液，将梳子插入模子，从梳子一端加入胶，当胶液快到梳齿时，使 模子向加胶端倾斜，继续慢慢加胶，边加边放端模子以防止气泡形成，室温放置1h使 之凝固.然后拔掉梳子，顶部加入1×TbE封闭，备用.
2)电泳
取10μlpCR产物，加入10μl变性剂(95%甲酰胺，10mmol/LEDTA0.02%溴酚蓝)、30μl 石蜡油，煮沸5min，取出立刻放入冰浴中2min以上，然后将水相全部上样，10-15℃下 电泳.开始在300V电压下电泳5min，然后在120V电泳8h，取下凝胶，将其浸在含 0.5ug/ml溴化锭的1×TbE缓冲液中染色30--45min，在紫外灯下观察，或进行银染.
3)银染法
将pAG板用去离子水洗二次，浸入10%乙醇和0.5%冰醋酸溶液固定6min.用去离子水洗 二次，再浸入0.2%AgNO3溶液中10min.用去离子水洗3--5次，然后浸入1.5%NaOH和 0.4%甲醛溶液中显色7min.最后，用0.75%NaCO3终止显色.
四、SSCp的应用
自从Orita等用SSCp进行人类DNA多态性分析以来，该方法大量地用于检测和肿瘤发生 有关的基因突变，例如检测星形细胞瘤、脑瘤、小细胞肺癌、胃癌、肠癌等肿瘤中的 p53基因的突变、肺癌的ras基因突变等.最近Sugano等用银染色SSCp法，成功地检测 了c-Ki-ras2基因第12位的突变，电泳和银染色过程在2.5小时内完成.SSCp还用于检 测引起人类遗传性疾病的研究上，如在囊性纤维化中起作用的CFTR基因、神经纤维瘤 1型基因、家族性结肠息肉基因的研究中.最近，Sharkar等用RNA-SSCp法检测了28名b 型血友病患者的凝血因子IX的基因序列，并与DNA-SSCp和直接基因测序法进行了比 较，发现在全长2.6kbp的凝血因子IX基因组中，有20处碱基点突变，RNA-SSCp可检测 出其中的70%，而DNA-SSCp只能检测出35%，显示了RNA-SSCp比DNA-SSCp有更高的灵敏 性.
