97.5℃5—6min
变性温度：≤95℃使其在整个扩增循环中保持足够活性
pfu DNA 聚合酶
耐热
5’→3’DNA聚合酶活性
3’→5’外切酶活性
精确度：pfu >Taq
但pfu扩增效率通常比Taq酶略差
文献报道：Taq+pfu 会起到较好效果
（2）Primer 本身不要出现内部互补序列
形成loop环，内部二级结构
如： GGGTCGATTCCTACCCATGC
（3）注意减少Primer间互补序列
导致2个Primer形成dimer
一般不要超过3个互补bp 
