四、实验药品和器具
1. 药品
(1)乙醚 (2)配制培养基所需药品(略)
2. 器具
(1)麻醉瓶 (2)镊子 (3)白瓷板 (4)毛笔 (5)吸水纸 (6)海绵垫
(7)果蝇瓶(指管) (8)棉花 (9)解剖镜 (10)死蝇盛留器 (11)灭菌锅
五、实验步骤
1. 麻醉
对果蝇进行检查时,用乙醚麻醉,使果蝇处于昏迷状态。使用时将乙醚(2~3滴)滴到麻醉瓶的棉花球上(注意不要让乙醚流进瓶内),麻醉瓶要保持干燥,否则会粘住果蝇翅膀,影响观察。麻醉果蝇时,先将长有果蝇的培养瓶在海棉垫上敲,使果蝇全部震落在培养瓶底部,然后迅速打开培养瓶的棉塞,把果蝇倒入去盖的麻醉瓶中,并立即盖好麻醉瓶,待果蝇全部昏迷后,倒在白瓷板上进行观察。
果蝇的麻醉程度看实验要求而定,对仍需培养的果蝇,以轻度麻醉为宜。但对不再培养,单单进行性状观察的果蝇可以深度麻醉,甚至致死也无妨(果蝇翅膀外展45°角,说明死亡)。检查完毕后,把不需要的果蝇倒入盛有煤油或酒精的瓶中(死蝇盛留器)。
2. 果蝇交配
将雌雄果蝇放在一起培养,雌蝇的生殖器中有贮精囊,可保留交配所得的大量精子,雌蝇一次交配所得的精子,足够它多次排出的卵受精,因此在做杂交试验时,雌蝇必须选用处女蝇(没有交配过的雌蝇)。雌蝇孵出后12小时内不会交配,这个时间内把果蝇全部倒出,分出雌雄蝇,单独饲养,这时收集的雌蝇是处女蝇。杂交时把所需品系的雄蝇直接放到处女蝇培养瓶中,贴好标签,注明两亲本的基因型及交配日期,进行培养。7~8天后倒掉亲本(一定要倒干净,以免亲代和子代混淆),待F1成蝇羽化后开始计算,观察性状。可靠的计数及观察是培养开始的20天以内(再晚上F2也可能有了)。若须继续实验,观察F2,可在F1内挑出雌雄数对,另外培养,因为这次是用F1作亲本,进行个体间互交,所以这时不是处女蝇也可以。但如要把F1雌蝇与另一品系雄蝇杂交时,还要严格地选取处女蝇,方法同上。
3. 原种培养
在作新的留种培养时,应事先检查一下果蝇有没有混杂,以防原种丢失。亲本的数目一般每瓶5~10对,移入新瓶时,须将培养瓶横卧,然后用毛笔将麻醉的果蝇从白瓷板上轻轻扫入,待果蝇醒过来后再把培养瓶竖起,以防果蝇粘在饲料上。原种每2~4周换一次培养基(依温度而定,10~15℃约4周换一次,20~25℃约二周换一次)。每一原种培养至少保留两套,培养瓶的标签上要写明突变名称,培养日期等。作原种培养温度可控制在10~15℃,培养时避免日光直射。
果蝇在适宜条件下会产子代,在肉眼能看到幼虫时就可把亲本倒掉,几天以后,新的成蝇便产生。待成蝇有了足够保种的数量后,要调换培养瓶,作为下一代的亲本,继续培养。
原种果蝇培养遇到的麻烦是饲料发霉。发霉的原因很多,如用具没有灭菌,空气污染,亲本不及时倒掉……,都会引起饲料发霉。严重的霉菌污染会影响果蝇的生长。饲料中加丙酸可以抑制霉菌,但并不能完全制止。发现培养瓶中有少量霉点时可用烧过的解剖针挑出。若大量霉菌污染,可把果蝇全部倒在一个消毒过的空指管中,让它活动2~3小时,换一支指管,再活动1~2小时,而后倒入一支新的培养瓶中继续培养,这样可以防止霉菌污染。
原种保存遇到的另一个问题是混杂,几个不同品系的果蝇在一起培养,一定要防止混杂。培养瓶的塞子要做得紧些,不使果蝇逃出。调换培养瓶时,要防止果蝇飞散。外逃的果蝇要打死。发现了混杂的原种,要根据原种果蝇的全部特征,挑出数对雌雄蝇饲养,进行筛选直到完全没有分离为止。这样做,费时费力,只是在不得已时才采用。一般混杂时,只要方便,可以重新引种,将混杂种弃去。


